Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

11.8: Гелевий промокання

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    5833

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Гелевий блоттинг - це методика візуалізації певної підмножини макромолекул - білків, або фрагментів ДНК або РНК - спочатку присутніх у складній суміші. Кроки:

    1. Відокремити молекули за допомогою електрофорезу. Це робиться в гелі, який дозволяє молекулам мігрувати під впливом електричного поля.
    2. «Промокніть» їх нітроцелюлозним фільтром. З невідомих причин молекули щільно прилипають до фільтра і збережуть своє взаємне положення при заливанні рідиною на наступному етапі.
    3. Купайте фільтр розчином, що містить «зонд»: молекулу, яка буде поєднуватися конкретно з молекулами-мішенями; тобто той (ів), який ви шукаєте, і несе засіб візуалізації, наприклад радіоактивний або флуоресцентний маркер.

    Південний Блот

    Діаграма ілюструє процедуру виявлення фрагментів ДНК, що містять ту чи іншу послідовність. ДНК витягується з клітини і частково перетравлюється рестрикційної ендонуклеазою. Отримані фрагменти ДНК відокремлюються електрофорезом, а потім денатуруються з утворенням одноланцюгових молекул (SSDNA). Не змінюючи їх положення, відокремлені смуги SSDNA переносяться на нітроцелюлозний фільтр і піддаються впливу радіомаркованої кДНК або РНК. Якщо зонд виявить взаємодоповнюючі послідовності ДНК, він зв'яжеться з ними. Наявність зонда в певній смузі виявляється за допомогою авторентгенографії.

    альт
    Малюнок\(\PageIndex{1}\): Південний Блотінг

    Ця процедура була розроблена Е.М. Південним і готовий продукт носить назву «Південний пляма». Ця ж основна процедура може бути використана і для розділення і візуалізації молекул РНК і білкових молекул. Як гумористичне продовження терміну «Південний плям», вони отримали назву «Північний» і «Західний» плями відповідно (Таблиця\(\PageIndex{1}\)).

    Таблиця\(\PageIndex{1}\): Підсумок або загальні гелеві плями
    Тип помазки Молекули, розділені електрофорезом зонд
    Південний SSDNA кДНК або РНК
    Північна денатурована РНК РНК або кДНК
    Західний Протеїн Антитіла