11.8: Гелевий промокання

Last updated

Oct 24, 2022
Save as PDF
- 11.7: Поліморфізми довжини фрагмента рестрикції
- 11.9: Генетичний скринінг на фенілкетонурію

$\newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} }$

$\newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}}$

$\newcommand{\id}{\mathrm{id}}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}$

$\newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}$

$\newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}$

$\newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}$

$\newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}$

$\newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}$

$\newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\id}{\mathrm{id}}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}$

$\newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}$

$\newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}$

$\newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}$

$\newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}$

$\newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}$

$\newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

Гелевий блоттинг - це методика візуалізації певної підмножини макромолекул - білків, або фрагментів ДНК або РНК - спочатку присутніх у складній суміші. Кроки:

Відокремити молекули за допомогою електрофорезу. Це робиться в гелі, який дозволяє молекулам мігрувати під впливом електричного поля.
«Промокніть» їх нітроцелюлозним фільтром. З невідомих причин молекули щільно прилипають до фільтра і збережуть своє взаємне положення при заливанні рідиною на наступному етапі.
Купайте фільтр розчином, що містить «зонд»: молекулу, яка буде поєднуватися конкретно з молекулами-мішенями; тобто той (ів), який ви шукаєте, і несе засіб візуалізації, наприклад радіоактивний або флуоресцентний маркер.

Південний Блот

Діаграма ілюструє процедуру виявлення фрагментів ДНК, що містять ту чи іншу послідовність. ДНК витягується з клітини і частково перетравлюється рестрикційної ендонуклеазою. Отримані фрагменти ДНК відокремлюються електрофорезом, а потім денатуруються з утворенням одноланцюгових молекул (SSDNA). Не змінюючи їх положення, відокремлені смуги SSDNA переносяться на нітроцелюлозний фільтр і піддаються впливу радіомаркованої кДНК або РНК. Якщо зонд виявить взаємодоповнюючі послідовності ДНК, він зв'яжеться з ними. Наявність зонда в певній смузі виявляється за допомогою авторентгенографії.

альт — Малюнок $\PageIndex{1}$ : Південний Блотінг

Ця процедура була розроблена Е.М. Південним і готовий продукт носить назву «Південний пляма». Ця ж основна процедура може бути використана і для розділення і візуалізації молекул РНК і білкових молекул. Як гумористичне продовження терміну «Південний плям», вони отримали назву «Північний» і «Західний» плями відповідно (Таблиця $\PageIndex{1}$ ).

Таблиця $\PageIndex{1}$ : Підсумок або загальні гелеві плями
Тип помазки	Молекули, розділені електрофорезом	зонд
Південний	SSDNA	кДНК або РНК
Північна	денатурована РНК	РНК або кДНК
Західний	Протеїн	Антитіла