Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

9.7: Сліди

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    5658

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Footprinting - це метод визначення точної послідовності ДНК, з якою зв'язується той чи інший ДНК-зв'язуючий білок. Приклади:

    • гормонально-рецепторні комплекси, які зв'язуються зі своїми елементами гормональної відповіді
    • фактори транскрипції, які пов'язують еукаріотичні оператори, підсилювачі та глушники
    • лак-репресор, який вимикає лак-оперон в кишковій паличці
    альт
    Малюнок 9.7.1 Стежка
    • Клонуйте шматок ДНК, який містить сайт оператора, до якого зв'язується репресор.
    • Позначте один кінець молекул ДНК радіоактивною молекулою, наприклад радіоактивним АТФ.
    • Переварити ДНК за допомогою ДНКАзи I.
      • DNaSe I скорочує молекули ДНК випадковим чином (на відміну від рестрикційних ферментів, які розрізають там, де вони знаходять певну послідовність)
      • Вибирайте такі щадні умови, що більшість молекул будуть розрізані тільки один раз.
    • Результатом буде суміш радіоактивних фрагментів різної довжини, з найменшим збільшенням довжини, представленим одним нуклеотидом.
    • Відокремте фрагменти за допомогою електрофорезу.
    • Зв'язування лак-репресора з послідовністю 24 пар основ в операторі запобігає атаці DNaSe I на цю область молекули.
    • Коли фрагменти розділені електрофорезом, ті, що представляють довжини, покриті репресором, будуть відсутні в авторадіограмі.
    • Отриманий зазор є «слід».
    • Один і той же зразок ДНК (незахищений репресором) піддається нормальному секвенуванню ДНК і отримана сходи вирівнюється з авторадіограмою сліду.
    • Точна послідовність основ в операторі лаку потім може бути прочитана безпосередньо, оскільки вони представляють собою сходи, відсутні в сліді.