9.11: Промокання

Last updated
Save as PDF

Page ID: 4857

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

Блоттинг забезпечує засіб ідентифікації конкретних молекул з суміші. Тут задіяні три основні етапи. Спочатку суміш молекул відокремлюється гелевим електрофорезом. Суміш може бути ДНК (Southern Blot), РНК (Northern Blot) або білок (Western Blot), а гель може бути агарозним (для ДНК/РНК) або поліакриламідом (для білка). По-друге, після завершення роботи гелю білки або нуклеїнові кислоти в гелі переносяться з гелю на мембрану/папір, яка фізично зв'язується з молекулами. Ця «пляма», як її ще називають, має відбиток смуг нуклеїнової кислоти або білка, які знаходилися в гелі (див. Малюнок зліва). Передача може бути здійснена дифузією або за допомогою електричного струму для переміщення молекул з гелю на мембрану. Мембрана може бути оброблена, щоб ковалентно зв'язати смуги з поверхнею плями. В останню чергу в мембрану додається візуалізуючий агент, специфічний для молекули, що представляє інтерес в суміші. Для ДНК/РНК це може бути додаткова послідовність нуклеїнових кислот, яка певним чином позначена (радіоактивність або барвник). Для білка, він, як правило, включає антитіло, яке конкретно зв'язується з білком, що цікавить. Потім пов'язане антитіло може бути спрямоване на інше антитіло, специфічне для першого антитіла. Вторинне антитіло, як правило, пов'язане з ферментом, який у присутності правильного реагенту каталізує реакцію, яка виробляє сигнал (колір або світло), що вказує, де пов'язане антитіло. Якщо цікавить молекула знаходиться в вихідній суміші, вона «засвітиться» і розкриється.

Малюнок 9.11.1: *Процедура північного промокання*

Дописувачі

Template:ContribAhern