16.4: У кремнієвій ПЛР
Використовуючи послідовності праймерів, можна визначити розмір та/або розташування продукту ПЛР. Це можна зробити за допомогою BLAST або за допомогою такої програми, як UGENE.
Використання BLAST
- Грунтовки для вставки ПВ92.
- Грунтовка вперед: 5 ′ GGATCTCAGGGGGGT GGCAA ATGCT 3 ′
- Зворотний ґрунтовка: 5 ′ GAAAG GCAA AG-ACA AGCCCAA 3 ′
- Відвідайте ВИБУХ: https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PAGE_TYPE=BlastSearch.
- Приклеюємо обидва грунтовки:
- GGT КЛІТКА GGGGGGT GG GCAAAAAAAAG GCAAG CCCAA
- Видаліть цифри 5′ і 3′.
- Вибираємо «Дещо схоже».
- Знайдіть місце розташування виробу і розмір.
Використання Ugene
- Вправа з використанням людського D-Loop праймерів.
- Переносний ґрунтовка 5'-TTAACTCCCATTAGCAT CACC-3'
- Грунтовка зворотна 5'-GAGGATGGGGGTCAAGGAC-3'
- Завантажте зразок файлу Генбанку: Геном мітохондрій людини.
- Відкрийте файл в Ugene.
- Виберіть кнопку «In Silico PCR» в крайньому правому куті (кнопка подвійної спіралі).
- Вставте праймери вперед і назад у відповідні місця.
5. Продукт ПЛР слід зазначити для однієї з послідовностей після натискання «Знайти продукти в будь-якому випадку».