Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

16.3: У обмеженні кремнію

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    6532

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Концепція

    Рестрикційні ферменти діють як молекулярні ножиці. Ті, які ми використовуємо в молекулярній біології, - це ті, які розрізаються в межах відомих послідовностей, які відбуваються досить часто, але досить рідко, щоб розрізати нашу ДНК на аналізувані фрагменти. Молекулярні біологи часто використовують 6-фрези. Це означає, що ділянку травлення «обмежений» послідовністю розпізнавання з 6 нуклеотидів. Ці нуклеотиди зазвичай паліндромні, як обговорювалося раніше.

    Уявіть собі лінійний шматок ДНК як шматок рядка. При нарізці нитки один раз, ви отримаєте 2 штуки. Тепер розглянемо плазміду. Це вже обговорювалося як круговий шматок ДНК. З колом немає кінців. різання плазміди один раз призводить до 1 шматочка ДНК на відміну від 2. Майте це на увазі при перетравленні кругових плазмід. При цьому нуклеотид 1 примикає до останнього нуклеотиду послідовності і суміжний з ним.

    У травленні кремнію

    1. Ця діяльність призначена для доповнення ідентифікації ДНК (активності)
    2. Запустіть UGENE і відкрийте такі файли:
    3. У меню «Об'єкти» клікніть правою кнопкою миші на послідовності і виберіть «Позначити як кругові»
      • Послідовності тепер будуть розглядатися як кругова ДНК.
      • Перший нуклеотид і останній нуклеотид стають сусідніми як безперервна послідовність таким чином.

    4. У верхньому меню виберіть Дії → Аналіз → Знайти сайти обмежень.

    • Це завантажить набір ферментів обмеження за замовчуванням.
    • Якщо жоден не завантажений, виберіть їх окремо (знайдено в алфавітному порядку)
      • Виберіть: Бамхі, Глі, Калі, Рай, Корі, Корв, Хінді, КПІ, ПТІ, Алі, Маї, Xbai, XMI, Ноти

    5. Дії → Клонування → Дайджест на фрагменти

    • Виберіть свій фермент.
    • Спробуйте Hind III для кожної плазміди.
    • Фрагменти будуть додані до кругового перегляду, а анотації до цих фрагментів будуть додані.
    • Ви можете використовувати цю інформацію, щоб обчислити, скільки фрагментів надходить від ферментів, виходячи з того, скільки разів вони розрізаються, і за нуклеотидними координатами, знайденими в анотації фрагмента.