3.6: Кінетика ферментів (активність)
- Page ID
- 6537
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
Фермент
Амілаза - фермент, який розщеплює амілозу (крохмаль) на молекули глюкози.
- Який тест можна використовувати для вказівки на наявність крохмалю?
- Які параметри вплинули б на здатність ферменту полегшувати швидкість реакції?
- Яка роль ферменту в хімічній реакції і з чого він зроблений?
- Який тест можна використовувати для вказівки на наявність глюкози?
Слинна амілаза виробляється в роті, де починається травлення.
Підшлункова амілаза виробляється в підшлунковій залозі і надходить в дванадцятипалу кишку тонкого кишечника.
Накладення слинної (зеленої) і панкреатичної (чирок) молекул амілази.
Вплив температури на активність ферментів
- Додайте 5 мл H 2 O в тюбик (це БЛАНК).
- Додайте 5 мл крохмалю (субстрату) в 3 окремі тюбики.
- Один на льоду (0° C), один на лавці (25° C), а один на водяній бані 40° C
- Додайте по 2 краплі йоду в кожну пробірку і перемішайте: Бланк, 0° C, 25° C і 40° C.
- Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм.
- Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хвилин.
- Додайте по 35 крапель розчину амілази в кожну пробірку одночасно. Змішайте і переконайтеся, що інкубація відбувається при правильній температурі.
- З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі і негайно поверніть трубки до належної температури.
- Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.
-
Час (хв)
0ºC
% Транс
25ºC
% Транс
40ºC
% Транс
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
Вплив рН на активність ферментів
- Додайте 5 мл води в порожню тубу (це БЛАНК)
- До 3 окремих пробірках додайте 2,5 мл буферного рН 3, рН 5 або рН 7
- Додайте 2,5 мл крохмалю (субстрату) в кожну з цих тюбиків (крім BLANK)
- Додайте по 2 краплі йоду в кожну пробірку і перемішайте: Blank, pH 3, pH 5, pH 7
- Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм
- Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хв.
- Додати по 35 крапель розчину амілази в кожну пробірку одночасно, перемішати до однорідності.
- З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі.
- Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.
|
Час (хв) |
рН 3 % Транс |
рН 5 % Транс |
рН 7 % Транс |
|
0 |
|||
|
2 |
|||
|
4 |
|||
|
6 |
|||
|
8 |
|||
|
10 |
|||
|
12 |
|||
|
14 |
|||
|
16 |
|||
|
18 |
|||
|
20 |
|||
|
22 |
Вплив концентрації ферменту на активність ферментів
- Додайте 5 мл води в порожню тубу (це БЛАНК)
- Додайте 5 мл буфера pH 7 в 3 окремі пробірки.
- Дотримуйтесь наведеної нижче схеми розведення:
Схема розведення амілази (ферменту)
- У 4 окремі тюбики додати 4 мл розчину крохмалю.
- Позначте їх 1x, 1/5x, 1/25x, 1/125x
- Додайте 2 краплі йоду в кожну крохмальну трубку і заготовку.
- Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм.
- Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хвилин.
- Додайте 35 крапель розведених розчинів амілази в відповідні марковані пробірки одночасно і перемішайте.
- Кожна трубка отримує різне розведення амілази.
- З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі.
- Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.
|
Час (хв) |
1 Х % Транс |
1/5 Х % Транс |
1/25 Х % Транс |
1/125 Х % Транс |
|
0 |
||||
|
2 |
||||
|
4 |
||||
|
6 |
||||
|
8 |
||||
|
10 |
||||
|
12 |
||||
|
14 |
||||
|
16 |
||||
|
18 |
||||
|
20 |
||||
|
22 |
Вплив концентрації субстрату на активність ферментів
- Додайте 5 мл води в порожню тубу (це БЛАНК)
- Додайте 5 мл буфера pH 7 в 3 окремі пробірки
- Дотримуйтесь наведеної нижче схеми розведення:
- У 4 кювети ДОДАЙТЕ 4 мл розведеного крохмального розчину.
- Позначте їх 1x, 1/2x, 1/4x, 1/8x.
- Додайте 2 краплі йоду в кожну крохмальну трубку і заготовку.
- Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм.
- Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хвилин.
- Додати по 35 крапель розчину амілази в кожну пробірку одночасно і перемішати.
- З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі.
- Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.
|
Час (хв) |
1 Х % Транс |
1/2 Х % Транс |
1/4 Х % Транс |
1/8 Х % Транс |
|
0 |
||||
|
2 |
||||
|
4 |
||||
|
6 |
||||
|
8 |
||||
|
10 |
||||
|
12 |
||||
|
14 |
||||
|
16 |
||||
|
18 |
||||
|
20 |
||||
|
22 |
Побудовувати результати
- Використовуючи plot.ly, побудуйте дані на тій же діаграмі.
- Обчисліть рядок, який найкраще підходить для кожного набору даних.
- Ухил представляє активність ферменту в кожному стані. Яка одиниця цієї діяльності?