Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

3.6: Кінетика ферментів (активність)

  • Page ID
    6537
  • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Фермент

    Файл: Амілаза reaction.png

    Амілаза - фермент, який розщеплює амілозу (крохмаль) на молекули глюкози.

    1. Який тест можна використовувати для вказівки на наявність крохмалю?
    2. Які параметри вплинули б на здатність ферменту полегшувати швидкість реакції?
    3. Яка роль ферменту в хімічній реакції і з чого він зроблений?
    4. Який тест можна використовувати для вказівки на наявність глюкози?

    слина_амілаза

    Слинна амілаза виробляється в роті, де починається травлення.

    панкреатична_амілаза

    Підшлункова амілаза виробляється в підшлунковій залозі і надходить в дванадцятипалу кишку тонкого кишечника.

    амілаза_оверлей

    Накладення слинної (зеленої) і панкреатичної (чирок) молекул амілази.

    Вплив температури на активність ферментів

    1. Додайте 5 мл H 2 O в тюбик (це БЛАНК).
    2. Додайте 5 мл крохмалю (субстрату) в 3 окремі тюбики.
      • Один на льоду (0° C), один на лавці (25° C), а один на водяній бані 40° C
    3. Додайте по 2 краплі йоду в кожну пробірку і перемішайте: Бланк, 0° C, 25° C і 40° C.
    4. Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм.
    5. Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хвилин.
    6. Додайте по 35 крапель розчину амілази в кожну пробірку одночасно. Змішайте і переконайтеся, що інкубація відбувається при правильній температурі.
    7. З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі і негайно поверніть трубки до належної температури.
    8. Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.

    Час (хв)

    0ºC

    % Транс

    25ºC

    % Транс

    40ºC

    % Транс

    0

         

    2

         

    4

         

    6

         

    8

         

    10

         

    12

         

    14

         

    16

         

    18

         

    20

         

    22

         

    Вплив рН на активність ферментів

    1. Додайте 5 мл води в порожню тубу (це БЛАНК)
    2. До 3 окремих пробірках додайте 2,5 мл буферного рН 3, рН 5 або рН 7
      1. Додайте 2,5 мл крохмалю (субстрату) в кожну з цих тюбиків (крім BLANK)
    3. Додайте по 2 краплі йоду в кожну пробірку і перемішайте: Blank, pH 3, pH 5, pH 7
    4. Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм
    5. Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хв.
    6. Додати по 35 крапель розчину амілази в кожну пробірку одночасно, перемішати до однорідності.
    7. З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі.
    8. Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.

    Час (хв)

    рН 3

    % Транс

    рН 5

    % Транс

    рН 7

    % Транс

    0

         

    2

         

    4

         

    6

         

    8

         

    10

         

    12

         

    14

         

    16

         

    18

         

    20

         

    22

         

    Вплив концентрації ферменту на активність ферментів

    1. Додайте 5 мл води в порожню тубу (це БЛАНК)
    2. Додайте 5 мл буфера pH 7 в 3 окремі пробірки.
    3. Дотримуйтесь наведеної нижче схеми розведення:

    розведення амілази

    Схема розведення амілази (ферменту)

    1. У 4 окремі тюбики додати 4 мл розчину крохмалю.
      • Позначте їх 1x, 1/5x, 1/25x, 1/125x
    2. Додайте 2 краплі йоду в кожну крохмальну трубку і заготовку.
    3. Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм.
    4. Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хвилин.
    5. Додайте 35 крапель розведених розчинів амілази в відповідні марковані пробірки одночасно і перемішайте.
      • Кожна трубка отримує різне розведення амілази.
    6. З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі.
    7. Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.

    Час (хв)

    1 Х

    % Транс

    1/5 Х

    % Транс

    1/25 Х

    % Транс

    1/125 Х

    % Транс

    0

           

    2

           

    4

           

    6

           

    8

           

    10

           

    12

           

    14

           

    16

           

    18

           

    20

           

    22

           

    Вплив концентрації субстрату на активність ферментів

    1. Додайте 5 мл води в порожню тубу (це БЛАНК)
    2. Додайте 5 мл буфера pH 7 в 3 окремі пробірки
    3. Дотримуйтесь наведеної нижче схеми розведення:

    1. У 4 кювети ДОДАЙТЕ 4 мл розведеного крохмального розчину.
      • Позначте їх 1x, 1/2x, 1/4x, 1/8x.
    2. Додайте 2 краплі йоду в кожну крохмальну трубку і заготовку.
    3. Прочитайте Бланк у спектрофотометрі та відкалібруйте його до 100% пропускання при 560 нм.
    4. Зчитуйте кожну трубку в спектрофотометрі. Це час 0 хвилин.
    5. Додати по 35 крапель розчину амілази в кожну пробірку одночасно і перемішати.
    6. З інтервалом в 2 хвилини швидко зчитуйте ВСІ трубки в спектрофотометрі.
    7. Продовжуйте читати зразки кожні 2 хвилини, поки не досягнете 22 хвилин на таблиці нижче.

    Час (хв)

    1 Х

    % Транс

    1/2 Х

    % Транс

    1/4 Х

    % Транс

    1/8 Х

    % Транс

    0

           

    2

           

    4

           

    6

           

    8

           

    10

           

    12

           

    14

           

    16

           

    18

           

    20

           

    22

           

    Побудовувати результати

    1. Використовуючи plot.ly, побудуйте дані на тій же діаграмі.
    2. Обчисліть рядок, який найкраще підходить для кожного набору даних.
    3. Ухил представляє активність ферменту в кожному стані. Яка одиниця цієї діяльності?