3.5: Кількісне виявлення білків (SpectroVis Plus)

Last updated

Oct 24, 2022
Save as PDF
- 3.4: Кількісне виявлення білка (активність)
- 3.6: Кінетика ферментів (активність)

$\newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} }$

$\newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}}$

$\newcommand{\id}{\mathrm{id}}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}$

$\newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}$

$\newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}$

$\newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}$

$\newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}$

$\newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}$

$\newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\id}{\mathrm{id}}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}$

$\newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}$

$\newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}$

$\newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}$

$\newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}$

$\newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}$

$\newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

Експериментальний фон

Бичачий сироватковий альбумін (BSA) - це білок, який циркулює в крові корів. Очищений БСА може бути використаний з розчином Biuret в серійних розведеннях для створення стандартної кривої. Стандартна крива проілюструє взаємозв'язок між концентрацією (залежною змінною) і поглинанням при 540 нм (незалежна змінна). Потім ми можемо використовувати цю криву для оцінки концентрації невідомих зразків.

1. На графіку ви пам'ятаєте, яка вісь є залежною, а яка незалежна змінна?

2. У наведеній нижче таблиці ви можете визначити, які зразки є негативним контролем, а які є позитивними контролями?

3. Що таке прогноз поглинання або інтенсивності кольору різних трубок?

Розбавити стандарти BSA

Етикетка 9 туб 1-9
Об'єднати компоненти наведеної нижче таблиці для отримання відповідної концентрації розчинів.

Таблиця розведення

Інструктор почне налаштовувати підрозділи для розподілу.
1. Підключіть SpectroVis Plus до LabQuest2.
2. Увімкнення живлення.
3. Виберіть програму LabQuest.
4. На вкладці «Лічильник» натисніть «Режим».
  1. Змініть режим на «Події з записом».
  2. Введіть назву: Концентрація.
  3. Введіть Одиниці: мг/мл.
  4. Виберіть «ОК».
  5. Якщо з'явиться повідомлення про збереження запуску, виберіть «Відкинути».
  6. Торкніться червоної області, що показує Поглинання, щоб викликати пункти меню
    1. Виберіть «Змінити довжину хвилі».
    2. Введіть 540.
  7. Торкніться червоної області, що показує Поглинання, щоб викликати пункти меню.
    1. Виберіть «Калібрувати».
    2. Виберіть «Розминка».
    3. Виберіть Завершити калібрування.
Помістіть трубку 1 (0 мг/мл) у кювету для вимірювання поглинання (A) у SpectroVis Plus.
- Торкніться значка картотеки, щоб зберегти ці дані.
Послідовно зчитуйте кожен зразок на збереженій довжині хвилі (A _540nm) і записуйте значення в таблиці нижче.

Запис даних

Побудувати кожен BSA розведення в plot.ly як розсіювач (Увійти за допомогою Facebook/Google/Twitter облікових даних безкоштовно).
Створіть найбільш підходящу лінію для цих стандартів за допомогою рівняння прямої.
Використовуйте рівняння лінії для оцінки концентрації невідомого зразка.