Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

1.19: Розливання агарних пластин

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    6248

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Цілі навчання

    Цілі:

    • Вивчіть основи асептичної техніки.
    • Навчіться готувати стерильні агарні пластини для вирощування бактерій

    Результати навчання студентів:

    Після закінчення цієї лабораторії студенти зможуть:

    • Практикуйте асептичну техніку.
    • Стерилізуйте і розлийте агарні тарілки вручну

    Вступ

    Мікроби навколо нас. У лабораторії 4 наш клас взяв зразки різних поверхонь і виявив, що мікроби легко знайти скрізь у навколишньому середовищі. Ми використовували стерильні агарні пластини, які забезпечували поживні речовини та правильний рН для росту бактерій. У цій лабораторії ви навчитеся виготовляти ці стерильні агарні пластини.

    Агар - це полісахарид, отриманий з червоних водоростей. Порошок агару спочатку розчиняють в киплячій рідини, а потім охолоджують до утворення студнеобразной твердої матриці. Оскільки мікроби не можуть перетравлювати агар, цей матеріал зазвичай використовується в лабораторіях для зберігання поживних речовин, необхідних бактеріям.

    Основні інструкції по заливці агарових плит представлені тут. Але існує багато різних рецептів для приготування середовищ росту для бактерій, оскільки деякі види бактерій вимагають різних комбінацій поживних речовин. Деякі типи загального агару включають кров'яний агар, агар Лурії Бертані (LB), агар МакКонкі, поживний агар (NA) та триптичний соєвий агар (TSA). Дотримуйтесь конкретних інструкцій щодо упаковки щодо кількості порошку та води для використання для середовищ росту, які ви робите. Рецепт приготування 1-літрового агару LB становить 9,1 г триптону 4,6 г дріжджового екстракту, 4,6 г NaCl і 13,7 г агару. Якщо в рецепті середовища потрібна добавка антибіотика, яка додається після того, як стерилізований агар охолоне до 60oC, щоб уникнути денатурації.

    Автоклав - це апарат високого тиску, який використовується лабораторіями, стоматологами та лікарнями для стерилізації обладнання, інструментів, скляного посуду, середовищ росту, рідин та біологічно небезпечних відходів. Автоклав застосовує високий тиск (15 фунтів на квадратний дюйм) і насичену пару при 121oC (250oF) протягом 15-20 хвилин, щоб знищити мікроби та спори. Після того, як носій пройшов цей цикл, він стерильний. Остудіть до 60-65oC перед додаванням будь-яких антибіотиків і розлийте в стерильні чашки Петрі.

    фото цифрових ваг в 3 різновидах з ваговими човнами і пензлями біля балансів
    Малюнок 1. Цифрові баланси та зважувальні човни

    Матеріали

    • дезінфікуючий спрей
    • паперові рушники
    • чашки Петрі
    • рукавички
    • LB порошок агару
    • Зважити човен
    • Стір-бар
    • 500 мл автоклавуваних пляшка
    • Автоклавна стрічка
    • Маркер Шарпі (кольоровий)
    • Деіонізована або дистильована вода
    • Електронні ваги
    • Автоклав або скороварка
    • Металевий піднос
    • Ампіцилін або арабіноза
    фото розпилювачів, ручок та рукавів чашок Петрі
    Малюнок 2. Деякі витратні матеріали для підготовки плит з носіями

    Порядок дій

    Підготовка ЗМІ

    1. Позначте чисту скляну автоклавувану пляшку об'ємом 500 мл із назвою носія, датою та початком.
      • Примітка: заповнюйте пляшку лише наполовину, щоб уникнути переливу під час процесу нагрівання в автоклаві.
    2. Для флакона об'ємом 500 мл розрахуйте необхідну вагу порошкоподібного середовища, щоб зробити 250 мл. Відніміть, що з 250, щоб визначити обсяг води, яку потрібно додати.
    3. Додайте __ мл дистильованої води в пляшку.
    4. Додайте __ г середовища з порошком агару в ту ж пляшку. (Ваша загальна кількість повинна бути 250 мл)
    5. Додайте стир-батончик (за бажанням). Перемішайте або струсіть до повного змішування і перевірте, щоб не було грудочок.
    6. Додайте шматок автоклавної стрічки до кришки або пляшки і послабте ковпачок на півоберта. Якщо використовується ємність без кришки, то нещільно накрийте алюмінієвою фольгою

    Налаштування автоклава

    1. Помістіть підготовлені пляшки для засобів масової інформації в металевий лоток.
    2. Додайте дистильовану воду, поки вона не покриє дно лотка; глибиною близько 1-2 см.
    3. Помістіть в автоклав.
    4. Автоклав при 121 o С протягом 15 хвилин при 15 фунтів на квадратний дюйм.
    5. Після завершення циклу надіньте термостійкі рукавички, щоб вийняти лоток і пляшки з машини.
    6. Дайте пляшкам охолонути приблизно до 60 o С.

    Підготовка робочого простору:

    1. Щоб зберегти якомога стерильніше навколишнього середовища, щоб уникнути забруднення засобів масової інформації та пластин, надіньте лабораторний халат та рукавички та використовуйте дезінфікуючий засіб або серветки, щоб витерти всі поверхні.
    2. Сюди входять стільниці і кромки, рукавички, ножиці, перманентні маркери і т.д.
    3. Обов'язково очистіть рукавички, якщо вони торкнулися іншої поверхні, яка не дезінфікується (наприклад, якщо ви торкнулися обличчя, руки, стільця тощо).
    4. Якщо є, використовуйте пальники Бунзена і обережно полийте біля відкритого полум'я, щоб краще запобігти потраплянню в повітря забруднень.
    5. Після того, як область буде продезінфікована, винесіть стерильні чашки Петрі. Зберігати стерильний посуд закритою.
    6. Встаньте пакетик вертикально.
    7. Щоб зберегти пластинчастий мішок для повторного використання для зберігання, ігноруйте будь-які позначки «Tear Here» та відріжте невеликий куточок від верхньої частини сумки. Вставте половину ножиць в цей отвір і розріжте уздовж складки мішка.
    8. Переверніть всю стопку тарілок догори дном, з розрізаним отвором в самому низу стопки.
    9. Акуратно нанесіть невелику кількість тиску вниз, одночасно згортаючи мішок вгору.
    10. Складіть або згорніть порожній мішок і відкладіть в сторону, щоб використовувати для повторного розфасовки.

    Смугаста тарілки

    1. Щоб швидко розрізнити пластини, які мають схожий зовнішній вигляд, можна використовувати код смужки. Поєднання різнокольорових перманентних маркерів може означати різні добавки до тарілки. Наприклад, зелена смуга може означати ампіцилін, тип антибіотика, який був доданий до середовища в цій пластині. Смугасті коди специфічні для окремої лабораторії, тому завжди перевіряйте кодову клавішу.
    2. Щоб нашивати пластину, верхня І низ повинна бути промаркована кодом.
    3. Візьміть маркер з кольором в ключі, і з неупакованою стопкою тарілок нанесіть м'яку кількість тиску рукою на верхню частину стопки.
    4. Намалюйте лінію прямо вниз від верхнього краю до основи кожної пластини в стопці.
    5. Якщо все зроблено швидко, можливо, вам доведеться повернутися і перемалювати лінію на нижній основі.
    6. Якщо код страйпу має інший рядок або колір, повторіть процес, додавши ще один рядок.
    7. Відстань між другою лінією повинна бути в межах 1 см від першої лінії.
    8. Повторюйте процес, поки код страйпу не завершиться.

    Встановлення тарілок

    1. Починайте розкладати пластини. Переконайтеся, що вершини та днища пластини не відокремлюються.
    2. Помістіть окремі тарілки по краю столу (не в стопки), щоб створити лінію або ланцюжок тарілок.
    студент розливу засобів масової інформації в чашку Петрі з стопками порожній посуд поблизу
    крупним планом подання руки заливки засобів масової інформації в чашку Петрі, використовуючи метод розкладачки
    3 пері страви зі ЗМІ
    Малюнок 3: Розливні плити

    Заливка тарілок

    1. Як тільки середовище охолоне до 60 о С, рідкий розчин готовий до заливання.
    2. У цей час антибіотик (наприклад: ампіцилін) може бути доданий до середовища і обережно закрутити або перемішати, щоб перемішати. Примітка: не додавайте антибіотик, якщо рідина гарячіша за 60 o С, оскільки антибіотик буде денатурований.
    3. Розкрийте пляшку для засобів масової інформації і тримайте пляшку в домінуючій руці. Примітка: як тільки пляшка відкрита, не розмовляйте. Розмова дозволить бактеріям з рота стати повітряно-крапельним і може забруднити засоби масової інформації.
    1. Кришку можна тримати в тій же руці (між пальцями), що і ваша пляшка, або можна помістити на дезінфіковану поверхню.
    2. Візьміть тарілку іншою рукою і посуньте її до краю столу, при цьому тримаючи її закритою.
    3. Як тільки пластина виявиться на краю, відкрийте кришку так, ніби на одному кінці є уявний шарнір; так пластина відкривається, як розкладачка.
    4. Налийте носій на дно тарілки, поки він просто не покриє поверхню. Чи не пересипають заливку.
    5. Закрийте кришкою і дайте охолонути. Засоби масової інформації будуть твердими.
    6. Залиште плити на добу, якщо це можливо, щоб конденсат випарувався з плити. Ви можете помістити пластини в інкубатор 25C на ніч.
    7. Укладайте пластини з однотипними носіями і посуньте пластикову гільзу поверх верхньої частини.
    8. Переверніть стопку і заклейте пластикову гільзу малярським скотчем.
    9. Позначте стрічку з типом носія, датою виробництва та назвою особи, яка виробляла стек.
    10. Зберігати герметичні стопки в холодильнику до використання.

    ВИВЧЕННЯ ПИТАННЯ

    1. Яке типове кількість агару входить в 1 л середовища?
    2. Чому потрібно вживати таких запобіжних заходів, щоб дезінфікувати простір та уникати дій, які можуть призвести до того, що бактерії та цвіль потрапляють у повітря? Який термін застосовується до цих запобіжних заходів та процедур?
    3. Чи забезпечує агар поживними речовинами для бактерій?
    4. Чому не можна включати ампіцилін до того, як він буде автоклавований?
    5. Чому ви повинні залишити застиглі пластини на добу, перш ніж запечатати їх і охолоджувати?