9.1: Порушення клітин
- Page ID
- 4749
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
Існує кілька способів розбиття відкритих клітин.
- Методи лізису включають зниження іонної сили середовища клітин, що зберігаються в. Це може призвести до того, що клітини набрякають і лопаються. М'які поверхнево-активні речовини можуть бути використані для підвищення ефективності лізису. Більшість бактерій, дріжджів і рослинних тканин, які мають клітинні стінки, стійкі до таких осмотичних ударів, однак, і часто потрібні більш сильні методи руйнування.
- Ферменти можуть бути корисними, допомагаючи деградувати клітинні стінки. Лізоцим, наприклад, дуже корисний для руйнування стінок бактерій. Інші ферменти, які зазвичай використовуються, включають целюлазу (рослини), гліканази, протеази, манни та інші.
- Механічне перемішування може застосовуватися у вигляді крихітних кульок, які струшують з суспензією осередків. Коли намистини бомбардують клітини на великій швидкості, вони розбивають їх. Sonication (звукові хвилі 20-50 кГц) забезпечує альтернативний метод для лізування клітин. Метод шумний, однак, і генерує тепло, яке може бути проблематичним для термочутливих з'єднань.
- Ще один засіб руйнування клітин передбачає використання «клітинної бомби». При цьому методі клітини поміщаються під дуже високим тиском (до 25 000 фунтів на квадратний дюйм). Коли тиск звільняється, швидка зміна тиску призводить до виділення розчинених газів у клітині у вигляді бульбашок, які, в свою чергу, розривають клітини.
- Кріопульверизація часто застосовується для зразків, що мають жорсткий позаклітинний матрикс, наприклад сполучна тканина або насіння. У цій техніці тканини піддаються.золу заморожують за допомогою рідкого азоту, а потім подрібнюють до дрібного порошку перед вилученням вмісту клітин буфером.
Який би метод не використовувався, отримані сирі лізати містять всі молекули в клітині, і, отже, повинні бути додатково оброблені, щоб розділити молекули на менші підмножини або фракції.