Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

2.2: Додаток II- Використання Деновікс

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    7043

    • Nathan Reyna, Ruth Plymale, & Kristen Johnson
    • Ouachita Babtist University & University of New Hampshire
    \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Як використовувати Деновікс

     

    Перегляньте відео YouTube щодо питань для DeNoVix.

    (https://www.youtube.com/user/denovixvideos/videos)

    Деновікс дозволяє вимірювати концентрацію ДНК, РНК і білка в парі мікролітрів розчину. Найкраще використовувати 1,5 - 2\(\mu L\)\(\mu L\) для точних вимірювань. Він також має здатність вимірювати флуоресцентно позначені молекули.

    Запуск Denovix шляхом дотику до екрану. Налаштуйте параметри для вимірювання нуклеїнової кислоти/дволанцюгової ДНК (dsDNA).

    1. Чистий Деновікс. Піпеткою 5-10\(\mu L\) води на п'єдестал (металева частина, яка була під пахвою з отвором посередині), закрийте руку, а потім протріть воду KIM-серветкою (без паперових рушників).
    2. Тепер потрібно буде виміряти заготовку. (Це повинна бути та сама рідина, в якій розчинений ваш зразок). Використовуйте буфер елюції, який ви використовуєте у вашому мініпрепі Zymopure. Підніміть металеву руку і\(\mu L\) піпетку 2 вашої порожньої рідини на п'єдестал. (Уникайте введення бульбашок.)

    4. Акуратно опустіть руку і натисніть на порожню кнопку на екрані.

    5. По завершенні підніміть руку і просто протріть чистим KIM-серветкою (не використовуйте паперовий рушник!).
    Тепер ви готові виміряти кілька зразків.
    (Рекомендується повторно очищати інструмент кожні 30 хв.)

    6. Додайте 1,5 або 2\(\mu L\) зразка ДНК та натисніть кнопку вимірювання на екрані.

    Примітка: Вам не доведеться чистити водою між зразками. Просто витріть п'єдестал насухо, коли будете готові до наступного зразка. Повторіть для всіх зразків.

    7. Запис концентрації ДНК (нг/\(\mu L\)), співвідношення 260/280 та 260/230 для всіх зразків.
    260/280 = співвідношення ~ 1,7- 1,80 вважається чистою ДНК (найбільш важливе значення) співвідношення
    260/230 зазвичай знаходяться в діапазоні 2,0-2,2 (можуть сильно варіюватися)

    8. Чистий Деновікс. Піпеткою 10\(\mu L\) води на п'єдестал, закрийте руку, а потім витріть воду за допомогою
    KIM-Wipe... потім закрийте програму. (Натисніть кнопку додому.)

    Що означають мої цінності?

    Посилання на веб-сайт DeNovix, щоб дізнатися більше: https://www.denovix.com/tn-130-purity-ratios-explained/

    • 260/280 Співвідношення чистоти нуклеїнових кислот

    «Співвідношення 260/280 зазвичай використовуються для визначення чистоти вимірювань нуклеїнової кислоти. Це співвідношення найчастіше використовується для визначення наявності білка і/або фенолу в виділеному зразку нуклеїнової кислоти. У таблиці 1 описано загальний допустимий діапазон для цих співвідношень; однак вони не є гарантією чистоти зразка».

    • 260/230 Співвідношення чистоти нуклеїнових кислот

    «Співвідношення 260/230 використовується для вказівки на наявність небажаних органічних сполук, таких як тризол, фенол, гуанідин HCL та тіоцианат гуанідину. Загальноприйнятні співвідношення 260/230 знаходяться в діапазоні 2,0 - 2,2. Значення, вищі за це, можуть свідчити про забруднення вищезазначеними сполуками».

    Співвідношення 260/280 нижче 1,5 не робить ДНК непридатною для будь-якого застосування, але більш низькі співвідношення вказують на наявність більшої кількості білкових забруднень, які можуть перешкоджати крокам нижче за течією. 260/230 міра залишкових забруднень від процесу очищення. Низькі коефіцієнти можуть вказувати на нечисту ДНК, яка буде менш успішною на наступних кроках.