Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

1.7: Щеплення

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    6923

    • Nathan Reyna, Ruth Plymale, & Kristen Johnson
    • Ouachita Babtist University & University of New Hampshire
    \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Щеплення однойменних культур

    Невеликий зразок бактерій береться з тарілки і поміщається в бульйон LB для використання в ZymoPure miniprep або для тривалого зберігання.

    Матеріали Температура зберігання
    стерильні зубочистки Кімната Темп
    LB бульйон Кімната Темп
    Ізольована колонія перетворених бактерій Кімната Темп

    Порядок дій:

    Використовуючи стерильну техніку, забрати ізольовану колонію зі свіжої пластини (віком менше семи днів) і щепити LB-Miller середовище.

    1. Ви будете використовувати стерильну зубочистку, щоб забрати колонію, і ви можете просто опустити всю зубочистку в трубку з рідким культуром.
    2. Для цього етапу вам буде надано стерильний 5 мл бульйону LB. Ви можете додати необхідний антибіотик до ЛБ перед щепленням вашої колонії (необов'язково).
    3. Інкубують з струшуванням протягом 8-16 годин при 37°С перед збором врожаю. Це призводить до максимальної врожайності плазміди з високим вмістом копій.

    (Як правило, після нічної інкубації поглинання десятикратного розведення культури на довжині хвилі 600 нм (А 600) з довжиною шляху 1 см повинна коливатися від 0,10-0,35.)

    Ці культури тепер можна використовувати в процедурі міні-преп або зберігати тривалий термін в гліцерині. (Див Додаток VI про те, як зробити свій власний запас гліцерину.)

     

    Зростання культур за ніч - Корисні поради, якщо у вас виникли труднощі.

    Різні культуральні середовища також матимуть глибокий вплив на ріст різних штамів бактерій. Більшість систем очищення плазмідної ДНК підходять для бактеріальних культур, вирощених у середовищі 1X Luria-Bertani (LB). Однак використання середовища LB-Miller, що містить більше NaCl, дасть значно більший урожай і настійно рекомендується. Більш багаті середовища, такі як 2X YT, CIRCLEGROW ® або приголомшливий бульйон, можуть бути використані для підвищення врожайності плазміди шляхом збільшення біомаси для заданого об'єму культури. Зберігайте біомасу в діапазоні, прийнятному для використовуваної системи ізоляції плазміди, оскільки перевантаження може призвести до поганої чистоти та виходу плазмідної ДНК