1.7: Щеплення

Last updated

Oct 24, 2022
Save as PDF
- 1.6: Перетворення клітин
- 2: Додатки: Використання обладнання

Nathan Reyna, Ruth Plymale, & Kristen Johnson
Ouachita Babtist University & University of New Hampshire

$\newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} }$

$\newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}}$

$\newcommand{\id}{\mathrm{id}}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}$

$\newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}$

$\newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}$

$\newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}$

$\newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}$

$\newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}$

$\newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\id}{\mathrm{id}}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

$\newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}$

$\newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}$

$\newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}$

$\newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}$

$\newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}$

$\newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}$

$\newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}$

$\newcommand{\Span}{\mathrm{span}}$

Щеплення однойменних культур

Невеликий зразок бактерій береться з тарілки і поміщається в бульйон LB для використання в ZymoPure miniprep або для тривалого зберігання.

Матеріали	Температура зберігання
стерильні зубочистки	Кімната Темп
LB бульйон	Кімната Темп
Ізольована колонія перетворених бактерій	Кімната Темп

Порядок дій:

Використовуючи стерильну техніку, забрати ізольовану колонію зі свіжої пластини (віком менше семи днів) і щепити LB-Miller середовище.

Ви будете використовувати стерильну зубочистку, щоб забрати колонію, і ви можете просто опустити всю зубочистку в трубку з рідким культуром.
Для цього етапу вам буде надано стерильний 5 мл бульйону LB. Ви можете додати необхідний антибіотик до ЛБ перед щепленням вашої колонії (необов'язково).
Інкубують з струшуванням протягом 8-16 годин при 37°С перед збором врожаю. Це призводить до максимальної врожайності плазміди з високим вмістом копій.

(Як правило, після нічної інкубації поглинання десятикратного розведення культури на довжині хвилі 600 нм (А 600) з довжиною шляху 1 см повинна коливатися від 0,10-0,35.)

Ці культури тепер можна використовувати в процедурі міні-преп або зберігати тривалий термін в гліцерині. (Див Додаток VI про те, як зробити свій власний запас гліцерину.)

Зростання культур за ніч - Корисні поради, якщо у вас виникли труднощі.

Різні культуральні середовища також матимуть глибокий вплив на ріст різних штамів бактерій. Більшість систем очищення плазмідної ДНК підходять для бактеріальних культур, вирощених у середовищі 1X Luria-Bertani (LB). Однак використання середовища LB-Miller, що містить більше NaCl, дасть значно більший урожай і настійно рекомендується. Більш багаті середовища, такі як 2X YT, CIRCLEGROW ^® або приголомшливий бульйон, можуть бути використані для підвищення врожайності плазміди шляхом збільшення біомаси для заданого об'єму культури. Зберігайте біомасу в діапазоні, прийнятному для використовуваної системи ізоляції плазміди, оскільки перевантаження може призвести до поганої чистоти та виходу плазмідної ДНК