14.2: ГМО харчування (активність)
- Page ID
- 6542
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
ПЛР виявлення ГМ-їжі
Коротко, геномна ДНК буде виділена з харчових продуктів, отриманих з рослинності. Потім генетична модифікація буде ідентифікована методом ПЛР промотора рослин, що використовується в генній інженерії, CamV 35S. Як позитивний контроль для відповідної екстракції ДНК буде використовуватися ПЛР на рослинно-специфічний тубулін.
- Додайте 100 мкл буфера лізису до кожної трубки, що містить рослинний або харчовий матеріал.
- Закрутіть чистий пластиковий товкач до внутрішньої поверхні 1,5-мл тюбика, щоб примусово подрібнити рослинну тканину або харчовий продукт протягом 1 хвилини.
- Додайте 900 мкл буфера лізису до кожної трубки, що містить
- Прокип'ятіть проби протягом 5 хвилин на водяній бані.
- Віджимайте протягом 2 хвилин, щоб гранули клітини і залишки їжі.
- Перенесіть 350 мкл кожного супернатанта в свіжу трубку
- Додайте 400 мкл ізопропанолу в кожну трубку
- Перемішати і залишити при кімнатній температурі на 3 хвилини.
- Віджимати протягом 5 хвилин.
- Акуратно злити і викинути супернатант з кожної трубочки. Повітряно-сухі гранули.
- Додайте 100 мкл буфера TE в кожну трубку. 5 хв при кімнатній температурі потім тримається на льоду.
ПЛР для промоутера 35S
- Етикетка одного тюбика «35S FP» для харчового продукту.
- Позначте одну трубку «35S WT» для сої дикого типу: Негативний контроль.
- Етикетка «35S RR» для соєвого заводу Roundup Ready®: Позитивний контроль.
- Різні групи будуть виконувати лише один контроль.
- Додайте 22,5 мкл суміші грунтовки/завантажувального барвника 35S до кожної трубки, що містить кульку ПЛР.
- 5′ -CCGCA GGTCCCAA АГАГАТGAC-3′ (Вперед Грунтовка)
- 5′ -СТАРИЙ GGGTCTTGCGCGCGAAGG-3′ (Зворотний грунтовка)
- Додайте 2,5 мкл ДНК харчового продукту в реакційну трубку з позначкою «35S FP».
- Додайте 2,5 мкл ДНК сої дикого типу або Roundup Ready® до відповідної реакційної трубки з позначкою «35S WT» або «35S RR».
ПЛР на тубулін: (Позитивний контроль якості ДНК та умов ПЛР)
- Позначте один тюбик «T FP» для харчового продукту.
- Позначте один тюбик «T WT» для сої дикого типу.
- Етикетка «T RR» для соєвого заводу Roundup Ready®.
- Різні групи будуть виконувати лише один контроль.
- Додайте 22,5 мкл суміші грунтовки/завантажувального барвника Tubulin до кожної трубки, що містить кульку ПЛР.
- 5′ -ГГГТК КТК КТТГТК-3′ (Вперед Грунтовка)
- 5′ -GGGAACCAT CAT CAT CAT CAT CAT CAT - 3′ (Зворотний грунтовка)
- Додайте 2,5 мкл ДНК харчового продукту в реакційну трубку з позначкою «T FP».
- Додайте 2,5 мкл ДНК сої дикого типу або Roundup Ready® до відповідної реакційної трубки з позначкою «T WT» або «T RR».