15: Західні плями

Last updated
Save as PDF

Page ID: 4343

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

Західні плями - одна з найбільш широко використовуваних методик в клітинній біології. У західному блоті дослідники користуються вишуканою чутливістю антитіл для виявлення білків, що цікавлять складні зразки. У цій лабораторії ви дізнаєтеся про різні види антитіл, які використовуються в західних плямах. Ви будете використовувати західні плями для аналізу експресії білка Met і LacZ в перетворених штамах дріжджів.

Цілі

Наприкінці цієї лабораторії студенти зможуть:

Поясніть, як виробляються моноклональні і поліклональні антитіла.
Визначте різні функціональні області антитіл і поясніть, як вони використовуються в західних плямах
Розробіть стратегію, яка використовує антитіла для виявлення білків, позначених епітопом.
Підготуйте західний блот для аналізу експресії білка в екстрактах клітин.

Західні плями надають спосіб знайти голяву «голку в стозі сіна». Типова клітина експресує тисячі різних білків, і часто важко виявити зміни експресії улюбленого білка (Yfp) без зонда, який здатний дискримінувати Yfp на великому тлі непов'язаних клітинних білків. На щастя, антитіла забезпечують високоспецифічні молекулярні зонди, які можуть бути використані для виявлення експресії білків на західних плямах. Щоб оцінити чутливість західних плям, корисно мати деяке розуміння структури антитіл та виробництва антитіл під час імунних відповідей. (Відмова від відповідальності: Наступні абзаци надають дуже скорочений огляд антитіл та одного сегмента складної імунної системи хребетних. Кафедра пропонує курс імунології, який познайомить вас з більш тонкими деталями цієї захоплюючої системи.)