11: Картування обмежень

Last updated
Save as PDF

Page ID: 4204

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

Рестрикційні ендонуклеази (РЕЕ) розпізнають і розщеплюють специфічні ділянки в молекулах ДНК. У природі ВДЕ є частиною систем захисту бактерій. У лабораторії молекулярної біології вони є незамінним інструментом як для аналізу, так і для побудови молекул ДНК. У цій лабораторії ви будете використовувати REs, щоб розрізнити, які плазміди містять S. cerevisiae або S. pombe ORF або бактеріальний ген LacZ.

Цілі

Наприкінці цієї лабораторії студенти зможуть:

описати біологічне походження та функції ВДЕ.
використовувати онлайн-інструменти для ідентифікації місць розпізнавання ВДЕ в молекулі ДНК.
розробити стратегію розрізнення молекул ДНК шляхом вибору РЕЕ для використання в дайджестах ДНК.
інтерпретувати візерунки рестрикційних фрагментів, розділених на гелі агарози.

В останньому експерименті ваша група виділила три різні плазміди з перетворених бактерій. Одна з трьох плазмід несе ген S. cerevisiae MET, який був інактивований у вашому штамі дріжджів. Цей ген MET був клонований у плазміду PbG1805 (Gelperin et al. , 2005). Друга плазміда несе гомолог S. pombe для гена MET, клонований у плазміду PyES2.1. Третя плазміда - це негативний контроль, який містить бактеріальний ген LaCZ ⁺, клонований у PyES2.1. У цій лабораторії ваша команда розробить та реалізує стратегію розрізнення плазмід за допомогою ендонуклеаз обмеження. У наступній лабораторії ви відокремите продукти рестрикційних дайджестів або фрагментів рестрикції за допомогою електрофорезу агарозного гелю, генеруючи карту обмежень.