10: Плазміди

Last updated
Save as PDF

Page ID: 4368

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

Плазміди - це невеликі кругові шматочки ДНК, які реплікуються незалежно від хромосоми господаря. Плазміди зробили
революцію в молекулярній біології, дозволивши дослідникам отримати багато копій власних молекул ДНК.
У цій лабораторії ви виділіть плазміди з непатогенних штамів кишкової палички, які ви будете використовувати
в наступних експериментах для перетворення штамів Saccharomyces cerevisiae.

Цілі

Наприкінці цієї лабораторії студенти повинні мати можливість:

опишіть будову плазмід і механізм їх реплікації.
визначити функціональні елементи, які були сконструйовані в лабораторні плазміди.
пояснити, як фізичні властивості плазмід використовуються при їх очищенні.
виділяють плазміди з трансформованих штамів кишкової палички.

Плазміди - це робочі конячки молекулярної біології. Плазміди - це невеликі кругові молекули ДНК, які відтворюються незалежно від хромосом у мікроорганізмах, які їх містять. Плазміди часто називають векторами, оскільки вони можуть бути використані для перенесення чужорідної ДНК в клітину. Плазміди, що використовуються в молекулярній біології, були побудовані дослідниками, які використовували технологію рекомбінантної ДНК для включення багатьох різних функціональних елементів у природні плазміди. Плазміди були розроблені для перенесення до 10 кб чужорідної ДНК, і вони легко виділяються від мікроорганізмів для маніпуляції в лабораторії. У наступних кількох лабораторіях ваша команда працюватиме з плазмідами надмірної експресії дріжджів. Ваша команда працюватиме з трьома плазмідами: плазмідою, що несе ген S. cerevisiae MET, плазмідою, що несе гомолог S. pombe, і плазмідою, що несе ген бактеріального LacZ, який буде діяти як негативний контроль. У цій лабораторії ви виділіть плазміди з бактеріальних культур. У найближчі кілька тижнів ви охарактеризуєте плазміди, а потім використаєте їх для перетворення мутантних штамів дріжджів, перевіряючи, чи збереглася функція гена MET між S. cerevisiae та S. pombe.