7: ПЛР колонії дріжджів

Last updated
Save as PDF

Page ID: 4516

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

Штами S. cerevisiae, які ми використовуємо в цьому семестрі, були побудовані проектом видалення генів Saccharomyces. У проекті дослідники дріжджів систематично замінювали кожен ORF в геномі дріжджів бактеріальним геном стійкості до канаміцину (KAN ^R). У цій лабораторії ви будете використовувати полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) для ідентифікації порушених генів MET у ваших деляційних штамах. Термостабільні ДНК-полімерази (вище) відіграють ключову роль у ПЛР.

Цілі

Наприкінці цієї лабораторії студенти повинні мати можливість:

опишіть реакції, що відбуваються при різних температурах, що використовуються в циклах ПЛР.
розробити олігонуклеотидні праймери для посилення послідовностей за допомогою ПЛР.
пояснити, як зміни температури відпалу та часу продовження впливають на виробництво продуктів ПЛР.
розробити та здійснити стратегію ПЛР, яка розрізняє три штами делеції.

У попередній лабораторії ви використовували різні культуральні середовища, щоб розрізняти різних S. cerevisiae з мутантами. Ваші результати, можливо, дозволили вам орієнтовно ідентифікувати ваші штами. У цій лабораторії ви будете використовувати полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) для більш переконливого виявлення мутантних штамів. Цей розділ починається з огляду ПЛР та проекту видалення генів Saccharomyces. Ви будете використовувати ці знання для розробки та реалізації стратегії виявлення штамів делеції метів методом ПЛР колонії дріжджів.