Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

1.3: Мікропіпетування

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    6247

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Цілі навчання

    Цілі:

    • Використовуйте різні інструменти, знайдені в біотехнологічній лабораторії.
    • Вимірюйте об'єм з точністю та точністю.
    • Піпет з точністю і точністю.
    • Дізнайтеся, як використовувати мікропіпетку для вимірювання дуже малих обсягів.

    Результати навчання студентів:

    Після закінчення цієї лабораторії студенти зможуть:

    • Робіть точні та точні вимірювання за допомогою мікропіпеток та серологічних піпеток.
    • Обчисліть процентну похибку для заданого вимірювання.
    • Читайте, встановлюйте та керуйте мікропіпеткою.
    • Визначте, яку піпетку слід використовувати для вимірювання конкретного обсягу.
    • Визначте, наскільки точно можна виміряти за допомогою кожної мікропіпетки.

    Введення в мікропіпетування:

    Можливість вимірювання дуже малих кількостей, мікролітрів (мкл), рідких хімічних речовин або реагентів є фундаментальною навичкою, необхідною в біотехнології або дослідницькій лабораторії. Вчені використовують прилад під назвою мікропіпетка для вимірювання цих дуже малих обсягів з точністю. Ця діяльність знайомить з технікою мікропіпетування. Пам'ятайте, як і у всіх дрібній моториці, цей новий навик зажадає практики і рішучості. Обов'язково керуйте мікропіпеткою повільно і обережно.

    Частина I: Вибір та налаштування мікропіпетки

    мікропіпетки з маркуванням деталей
    Малюнок 1. Позначені частини мікропіпетки, спереду і ззаду.

    Існує кілька розмірів мікропіпеток, що використовуються в біотехнологічній лабораторії. Сьогодні ви будете використовувати П-1000, П-200 і П-20. P-1000 вимірює обсяги між 100-1000 мкл, P-200 вимірює обсяги між 20-200 мкл, а P-20 вимірює обсяги в діапазоні 2-20 мкл. Важливо завжди підібрати правильну мікропіпетку для вимірюваного обсягу.

    Дивлячись на малюнок 3.1, можна побачити, що кожна мікропіпетка має схоже, але різне вікно дисплея. Для P1000 червоне число вказує на тисячі місць, а потім сотні, десятки та ті, що відображаються у вигляді невеликих вертикальних ліній. Кожен рядок представляє 2 мкл. P-200 зчитується по-різному. Дисплей зверху вниз читає, сотні, десятки, одиниці, а вертикальні лінії вважаються 0,2 мкл. Нарешті, P-20 можна прочитати зверху вниз десятками, одиницями та червоними десятими.

    3-значна шкала чисел у 3 загальних розмірах мікропіпеток, на прикладі налаштування позначено об'ємом, який буде видаватися для кожної мікропіпетки.
    Малюнок 2. Зчитування мікропіпетки різних розмірів.

    A. Вибір мікропіпетки

    Для кожної кількості, зазначеної нижче, вкажіть правильну мікропіпетку, необхідну для точного вимірювання обсягу, потім встановіть піпетку на вказану кількість і покажіть своєму партнеру.

    Таблиця 1. Вибір розміру піпетки
    Сума Потрібна піпетка Спостереження за партнерами
    1. 567 мкл:

    2. 160 мкл:

    3. 700 мкл:

    4. 25 мкл:

    5. 15 мкл:

    B. Налаштування мікропіпетки

    Матеріали

    • Мікропіпетка П-20
    • Наконечники П-20
    • Контейнер для відходів
    • Трубка червоного барвника в стійці для труб
    • Ламінований лист для піпетування

    Порядок дій

    1. Кожен студент завантажить 5, 10, 15 і 20 мкл червоного барвника на ламінований лист.
    2. Знайдіть p-20 і встановіть циферблат на 5 мкл.
    3. Тримайте мікропіпетку в домінуючій руці і акуратно, але надійно помістіть кінець мікропіпетки в наконечник відповідного розміру. Після того, як наконечник увімкнений, будьте обережні, щоб нічого не торкатися наконечника! Якщо ваш наконечник торкається лавки, лабораторного халата тощо, викиньте наконечник у контейнер для відходів та отримайте новий чистий наконечник піпету.
    4. Іншою рукою відкрийте ковпачок тюбика червоного барвника і доведіть трубку червоного барвника до рівня очей,
    5. Натисніть на поршень мікропіпетки вниз до першої зупинки і утримуйте великий палець в такому положенні.
    6. Помістіть кінчик піпета в розчин червоного барвника.
    7. Акуратно відпустіть великий палець від вантуза, щоб набрати рідину в наконечник.
    8. Переконайтеся, що наконечник має рідину і що в кінчику немає бульбашок.
    9. Закрийте трубку червоного барвника і покладіть назад у стійку для труб.
    10. Акуратно торкніться наконечника до центру кола, позначеного 5 мкл, і повільно натисніть до кінця вниз (до другої зупинки) на плунжері, щоб дозувати рідину.
    11. Повторіть цей процес для інших обсягів.
    12. Обов'язково стежте за своїми одногрупниками, щоб надати відгуки та допомогти з їх технікою.

    Результати

    Сфотографуйте або намалюйте свої плями та включіть це у свій лабораторний зошит як малюнок 1. Переконайтеся, що фігура має назву.

    Висновок

    1. Поспостерігайте, чи були ваші плями схожі за розміром з вашими одногрупниками.
    2. Який обсяг мав найбільшу мінливість?
    3. Що могло сприяти тому, що ваше місце було занадто великим чи малим?

    Частина II: Практика піпетування

    А. Мікропланшет мистецтва

    Матеріали

    • піпетка p20 (1)
    • мікропіпетка p200 (1)
    • Наконечники П-20/П-200
    • Художній набір мікропланшетів (дизайнерські картки, кольорові барвники та 96-луночний мікропланшет) (1)
    • Аналітичні або електронні ваги

    Порядок дій

    1. Отримайте 96-луночний мікропланшет, дизайнерську карту і тюбики кольорових барвників.
    2. Запишіть номер Microplate Art Design у свій лабораторний зошит.
    3. Використовуючи баланс грам, отримайте вагу вашого 96 добре мікропланшет і запишіть у свій ноутбук.
    4. Використовуючи мікропіпетку p200 з наконечником, роздайте 50 мкл барвника в лунки, написані на дизайнерській картці.
    5. Закінчивши піпетування, зважте заповнену мікропланшет та запишіть у свій лабораторний зошит.

    Результати

    1. Обов'язково запишіть свою вагу в грамах мікропланшетного до/після піпетування у вашому лабораторному блокноті.
    2. Використовуючи ці значення, обчисліть свою процентну похибку щойно створеної мікропланшета. Включіть розрахунок у свій лабораторний зошит.
    3. Сфотографуйте дизайн мікропланшета і включіть його у свій лабораторний ноутбук.

    ВИСНОВОК

    1. Чи була ваша помилка відсотків нижче +/- 5%? Якщо ваша процентна помилка була вище цього діапазону, докладніше про потенційні причини.
    2. Ваш візерунок виглядав правильно? Як можна було уникнути помилок у майбутньому?

    B. Матриця практики мікропіпеток

    Матеріали

    • піпетка p20 (1)
    • мікропіпетка p200 (1)
    • 1,5 мл мікрофужні трубки (3)
    • Перманентний маркер
    • Аналітичні або електронні ваги

    Порядок дій

    1. Позначте три мікрофужні трубки: 1, 2, 3,
    2. Зважте кожну трубку перед тим, як помістити всередину будь-яку рідину.
    3. Намалюйте таблицю 2 у своєму лабораторному блокноті та використовуйте її для запису своїх даних.

    Результати

    Таблиця 2. Розрахунок точності для мікропіпетування

    Трубка #

    Вага трубки (г)

    Вага тюбика+барвник (г)

    Теоретична вага барвника

    Фактична вага барвника

    % Помилка

    1

    2

    3
    1. Доставити обсяги, зазначені в таблиці 3, в кожну з 3 маркованих трубок.
    Таблиця 3. Обсяги, що підлягають піпетці в кожну трубку

    Трубка #

    Мікропіпетка

    Червоний барвник (мкл)

    Синій барвник (мкл)

    Зелений барвник (мкл)

    1

    Р1000

    210

    435

    332

    2

    Р200

    110

    153

    67

    3

    Р20

    15

    17

    10
    1. Зважте кожну пробірку після дозування піпеткою.
    2. Визначте теоретичну вагу барвника, використовуючи інформацію про вагу мл розчину барвника при кімнатній температурі, надану вашим інструктором.
    3. Визначте похибку% для кожної трубки.

    Висновок

    На основі ваших даних прокоментуйте наступне у вашому лабораторному блокноті:

    1. Яка мікропіпетка дала найбільш точне вимірювання?
    2. Яка мікропіпетка дала найбільш точне вимірювання?
    3. Що могло сприяти збільшенню відсотків помилок?

    Навчальні питання

    1. Перетворіть наступне:
      • 345 мл = ______________ мкл
      • 0,54 мл = _____________ мкл
      • 5,2 л = ________________ мл
    2. Яку мікропіпетку ви б обрали для вимірювання 550 мкл? 17 мкл? 167 мкл?
    3. Зробіть 3 пропозиції, які інші біотехнологи можуть використовувати для підвищення точності мікропіпеток.
    4. Якщо припустити, що щільність води становить 1 грам на мілілітр, скільки має важити 550 мкл води?
      • 17 мкл води?
      • 167 мкл води?
    5. Яка формула обчислення процентної похибки?
    6. Який максимальний обсяг ви можете встановити для кожної мікропіпетки (П-1000, П-200, П-20)?