30.1: Огляд електрофорезу

Last updated
Save as PDF

Page ID: 27058

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

Електрофорез - це клас методів поділу, в якому ми відокремлюємо аналіти за їх здатністю рухатися через провідне середовище - зазвичай водний буфер - у відповідь на застосоване електричне поле. При відсутності інших ефектів катіони мігрують до негативно зарядженого катода електричного поля. Катіони з більшими співвідношеннями заряду до розміру - що сприяє іонам більшого заряду та меншого розміру - мігрують швидше, ніж більші катіони з меншими зарядами. Аніони мігрують до позитивно зарядженого анода, а нейтральні види не відчувають електричного поля і залишаються нерухомими.

Як ми побачимо незабаром, в нормальних умовах навіть нейтральні види та аніони мігрують до катода.

Існує кілька форм електрофорезу. У сляб гелевому електрофорезі провідний буфер утримується всередині пористого гелю агарози або поліакриламіду. Сляби формуються шляхом заливки гелю між двома скляними пластинами, розділеними розпірками. Типові товщини 0,25-1 мм. Гелевий електрофорез є важливою методикою в біохімії, де він часто використовується для поділу фрагментів ДНК і білків. Хоча це потужний інструмент для якісного аналізу складних сумішей, він менш корисний для кількісної роботи.

При капілярному електрофорезі провідний буфер утримується в капілярній трубці з внутрішнім діаметром, який зазвичай становить 25-75 мкм. Зразок вводиться в один кінець капілярної трубки, і в міру міграції через капіляр компоненти зразка відокремлюються і елітуються з колони в різний час. Отримана електроферограма виглядає схожа на хроматограму ГХ або ВЕРХ, і надає як якісну, так і кількісну інформацію.