Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

12.6: Проточна цитометрія, цитогенетика та молекулярна генетика

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    68746

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Класифікація лейкемії

    Класифікація гострого лейкемії спирається на використання різноманітних лабораторних результатів, включаючи морфологію, імунофенотипування, генетичні особливості та клінічні особливості. Класифікація дозволяє проводити відповідне лікування захворювання, лікування, прогноз та моніторинг. Лабораторія має вирішальне значення в цьому аспекті. Нижче наведено короткий виклад типу лабораторних досліджень, що беруть участь у класифікації гострого лейкемії на додаток до того, що вже обговорювалося.

    Проточна цитометрія

    Потокова цитометрія, також відома як імунофенотипування, - це метод, який може бути використаний для визначення роду клітини на основі клітинних маркерів (наприклад, кластера диференціації/маркерів CD) присутніх та стадії дозрівання клітини. 1

     

    Принцип:

    Моноклональні антитіла з флуоресцентними мітками, специфічними для цікавить поверхневого антигену, інкубуються разом із зразком. Зразки забираються проточним цитометром і вводяться в потік оболонкової рідини, щоб клітини могли розташовуватися централізовано, цей процес називається гідродинамічним фокусуванням. Лазер спрямований на клітини і пов'язані антитіла флуоресценції. Флуоресцентні детектори використовуються для виявлення флуоресценції і графік розсіювання проводиться на основі антитіл, пов'язаних. 2 Інші властивості, такі як розсіювання світла (у прямому та бічному напрямку), поєднуються з вимірюваннями інтенсивності флуоресценції для розрізнення популяцій клітин.

     

    Проточну цитометрію можна використовувати, щоб визначити, які клітини присутні, щоб допомогти діагностувати гострі лейкози та інші гематологічні розлади.

     

    Таблиця 1. Загальні поверхневі маркери для клітин крові. 2

    Клітинний рід Маркери поверхні
    незрілі клітини КД34, КД117
    Гранулоцити, моноцити КД13, СД14, КД15, КД33
    еритроцити CD71, глікофорин А
    Мегакаріоцити СД41, СД42, СД61
    Т-лімфоцити КД2, КД3, КД4, КД5, КД7, КД8
    B Лімфоцити КД19, СД20, СД22

    Цитогенетика

    Цитогенетика передбачає виявлення аномальних каріотипів, які можуть бути характерними для пов'язаного з цим розладом. 1

     

    Флуоресценція In Situ гібридизації (FISH)

    FISH - це молекулярний метод, який є цитогенетичним інструментом, який використовується для виявлення хромосомних аномалій, таких як транслокації, делеції, інверсії та дублікації.3

     

    Метод включає використання флуоресцентно позначеного ДНК або РНК зонда, який доповнює певну цільову послідовність. Після денатурування подвійної багатониткової ДНК до одноцепочечной ДНК маркованому зонду дозволяється інкубувати та гібридизувати з ДНК. Після інкубації зразок промивають, щоб видалити будь-які незв'язані зонди, а потім додається контрпляма для сприяння обстеженню. Зразки досліджуються за допомогою флуоресцентного мікроскопа, щоб шукати будь-які хромосомні аномалії в клітині. 3

    Молекулярна генетика

    Молекулярна генетика передбачає використання молекулярних методів для виявлення конкретних генетичних послідовностей і мутацій, які можуть бути характерними для діагнозу. 1

     

    Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)

    ПЛР зазвичай використовується для посилення певної цільової послідовності такої мутації. 4

    Посилання:

    1. Маккензі С.Б. Введення в кровотворні новоутворення. Клінічна лабораторна гематологія. 3-е изд. Нью-Джерсі: Пірсон; 2015. стор. 424-45.

    2. Czader M. проточний цитометричний аналіз при гематологічних порушеннях. В: Клінічні застосування та принципи гематології Родака. 5-е изд. Сент-Луїс, Міссурі: Сондерс; 2015. стор. 543-60.3. Ванс Г.Г. Цитогенетика. В: Клінічні застосування та принципи гематології Родака. 5-е изд. Сент-Луїс, Міссурі: Сондерс; 2015. стор. 498-512.

    4. Jackson CL, Mehta S. Молекулярна діагностика в гематопатології. В: Клінічні застосування та принципи гематології Родака. 5-е изд. Сент-Луїс, Міссурі: Сондерс; 2015. стор. 513-42.