Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

20.E: Лабораторний аналіз імунної відповіді (вправи)

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    3968

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    20.1: Практичне застосування моноклональних та поліклональних антитіл

    Окрім того, що вони мають вирішальне значення для нашої нормальної імунної відповіді, антитіла забезпечують потужні інструменти для досліджень та діагностичних цілей. Висока специфічність антитіл робить їх відмінним інструментом для виявлення та кількісної оцінки широкого спектру мішеней, від ліків до білків сироватки крові до мікроорганізмів. За допомогою аналізів in vitro антитіла можуть використовуватися для осадження розчинних антигенів, агглютинації клітин та нейтралізації ліків, токсинів та вірусів.

    Множинний вибір

    Для багатьох застосувань в лабораторії поліклональні антитіла працюють добре, але для деяких видів аналізів їм не вистачає достатнього ________, оскільки вони перехресно реагують з невідповідними антигенами.

    1. специфіка
    2. чутливість
    3. точність
    4. реактивність
    Відповідь

    A

    Як виробляються моноклональні антитіла

    1. В-клітини, що продукують антитіла від миші, зливаються з клітинами мієломи, а потім клітини вирощуються в культурі тканин.
    2. Миші вводять антиген, а потім з її сироватки збирають антитіла.
    3. Вони виробляються імунною системою людини як природна реакція на інфекцію.
    4. Вони виробляються імунною системою миші як природна реакція на інфекцію.
    Відповідь

    A

    Заповніть бланк

    Коли ми вводимо тварині з тим же антигеном вдруге через кілька тижнів після першого, відбувається ________, що означає, що антитіла, що виробляються після другої ін'єкції, в середньому пов'язують антиген міцніше.

    Відповідь

    спорідненість дозрівання

    При використанні MAB для лікування захворювань у людей, MAB спочатку повинні бути ________, замінивши ДНК постійної області миші ДНК постійної області людини ДНК.

    Відповідь

    гуманізований

    Якби ми використовували нормальні mAB миші для лікування захворювань людини, багаторазові дози призвели б до того, що пацієнт відповість ________ проти антитіл миші.

    Відповідь

    нейтралізуючі антитіла

    Поліклональна реакція на інфекцію виникає, оскільки більшість антигенів мають множинні ________,

    Відповідь

    епітопи

    Коротка відповідь

    Опишіть дві причини, за якими поліклональні антитіла частіше проявляють перехресну реактивність, ніж моноклональні антитіла.

    Критичне мислення

    Припустимо, ви проводили скринінг продукції в продуктовому магазині на наявність забруднення кишковою паличкою. Чи було б краще використовувати поліклональну антисироватку проти кишкової палички або MaB проти мембранного білка кишкової палички? Поясніть.

    20.2: Виявлення комплексів антиген-антитіла in vitro

    Лабораторні тести для виявлення антитіл і антигенів поза організмом (наприклад, в пробірці) називаються аналізами in vitro. Коли в розчині присутні як антитіла, так і відповідні їм антигени, ми часто можемо спостерігати реакцію опадів, при якій утворюються і осідають з розчину великі комплекси (решітки).

    Множинний вибір

    Освіта ________ є позитивним результатом в тесті ВДРЛ.

    1. флокулянт
    2. опади
    3. коагуляції
    4. яскраво-рожевий колір
    Відповідь

    A

    Титр тесту на нейтралізацію вірусу є найвищим розрідженням сироватки пацієнта

    1. в якому відсутня виявлена вірусна ДНК.
    2. в якому відсутній виявлений вірусний білок.
    3. що повністю блокує утворення нальоту.
    4. що зменшує утворення зубного нальоту не менше ніж на 50%.
    Відповідь

    D

    У аналізі Ouchterlony ми бачимо різку форму дуги преципітину між антигеном і антисироваткою. Чому ця дуга залишається видимою протягом тривалого часу?

    1. Молекули антитіл занадто великі, щоб дифузувати через агар.
    2. Осадова решітка занадто велика, щоб розсіяти через агар.
    3. Метанол, доданий після утворення дуги, денатурує білок і блокує дифузію.
    4. Молекули антигену хімічно з'єднані з гелевою матрицею.
    Відповідь

    Б

    Заповніть бланк

    При повільному додаванні антигену до антисироватки кількість преципітину поступово збільшувалася до досягнення ________; додавання більшої кількості антигену після цього моменту фактично зменшить кількість преципітину.

    Відповідь

    зона еквівалентності або зона еквівалентності

    Тест радіальної імунодифузії кількісно визначає антиген шляхом змішування ________ в гель, а потім дозволяючи антигену дифузійно висікати з добре розрізаного в гелі.

    Відповідь

    антисироватка

    Коротка відповідь

    Поясніть, чому гемоліз в тесті на фіксацію комплементу є негативним тестом на інфекцію.

    Що мається на увазі під терміном «нейтралізуючі антитіла», і як ми можемо кількісно оцінити цей ефект за допомогою аналізу вірусної нейтралізації?

    Критичне мислення

    Як IgM, так і IgG антитіла можуть бути використані в реакціях опадів. Однак один з цих класів імуноглобуліну буде утворювати опади в набагато менших концентраціях, ніж інший. Який це клас, і чому він настільки ефективніший в цьому плані?

    20.3: Аглютинаційні аналізи

    Окрім спричинення осадження розчинних молекул та флокуляції молекул у суспензії, антитіла також можуть згортати клітини або частинки (наприклад, латексні кульки, покриті антигеном) у процесі, який називається аглютинацією. Аглютинацію можна використовувати як показник наявності антитіл проти бактерій або еритроцитів. Аглютинаційні аналізи, як правило, швидко і легко виконуються на скляній гірці або мікротитрової пластині.

    Множинний вибір

    Ми використовуємо антисироватки для розрізнення різних ________ у межах виду бактерій.

    1. ізотипи
    2. серовари
    3. підвид
    4. лінії
    Відповідь

    Б

    Використовуючи антисироватки для характеристики бактерій, ми часто пов'язуємо антитіла з ________, щоб краще візуалізувати аглютинацію.

    1. латексні намистини
    2. еритроцити
    3. інші бактерії
    4. лейкоцити
    Відповідь

    A

    Скринінг-тест на антитіла, який робиться разом із претрансфузійним типуванням крові, використовується для забезпечення того, щоб реципієнт

    1. не має раніше невиявленої бактеріальної або вірусної інфекції.
    2. не має імунітету.
    3. насправді має групу крові, зазначену в онлайн-діаграмі.
    4. не виробляє антитіла проти антигенів поза системами ABO або Rh.
    Відповідь

    D

    Прямий тест Кумбса призначений для виявлення того, коли у людей є захворювання, яке спричиняє їх

    1. мають надмірно високу температуру.
    2. кинути робити антитіла.
    3. зробити занадто багато еритроцитів.
    4. виробляють антитіла, які зв'язуються з власними еритроцитами.
    Відповідь

    D

    Аналізи вірусної гемаглютинації працюють лише з певними типами вірусів, оскільки

    1. вірус повинен мати можливість безпосередньо зшивати еритроцити.
    2. вірус повинен вміти лізувати еритроцити.
    3. вірус не повинен бути в змозі лізувати еритроцити.
    4. інші віруси занадто небезпечні для роботи в клінічній лабораторії.
    Відповідь

    A

    Заповніть бланк

    У головному крос-матчі ми змішуємо ________ з донорськими еритроцитами і шукаємо аглютинацію.

    Відповідь

    сироватка пацієнта

    Реагент Кумбса - це антисироватка з антитілами, які зв'язуються з людиною ________.

    Відповідь

    імуноглобуліни/антитіла та/або комплемент

    Коротка відповідь

    Поясніть, чому титр аналізу прямого гемаглютинації є найвищим розведенням, яке все ще викликає гемаглютинацію, тоді як в аналізі на інгібування вірусної гемаглютинації титр є найвищим розведенням, при якому гемаглютинація не спостерігається.

    Чому лікар призначає прямий тест Кумбса, коли дитина народжується з жовтяницею?

    Критичне мислення

    При нестачі донорської крові пацієнтам може здаватися О-негативна кров, навіть якщо у них інша група крові. Чому це так? Якби O-негативні запаси крові були виснажені, що було б найкращим вибором для пацієнта з іншою групою крові, який критично потребує переливання? Поясніть свої відповіді.

    20.4: Імуноферментні аналізи (EIA) та імуноферментні аналізи (ІФА)

    Імуноферментні аналізи (EIA) використовуються для візуалізації та кількісної оцінки антигенів. Вони використовують антитіло, кон'юговане з ферментом для зв'язування антигену, а фермент перетворює субстрат у спостережуваний кінцевий продукт. Субстратом може бути або хромоген, або фтороген. Імунофарбування - це методика EIA для візуалізації клітин в тканині (імуногістохімія) або дослідження внутрішньоклітинних структур (імуноцитохімія). Прямий ІФА використовується для кількісної оцінки антигену в розчині.

    Множинний вибір

    В імуноферментному аналізі фермент

    1. зв'язується антиген-зв'язуючим сайтом антитіла.
    2. кріпиться до колодязя мікротитровая пластина.
    3. кон'югований з підозрюваним антигеном.
    4. пов'язаний з постійною областю вторинного антитіла.
    Відповідь

    D

    Використовуючи ОВД для вивчення мікротрубочок або інших структур всередині клітини, ми спочатку хімічно фіксуємо клітину, а потім обробляємо клітини спиртом. Для чого призначено це лікування алкоголем?

    1. Це робить отвори в клітинній мембрані досить великими для проходження антитіл.
    2. Це робить мембрану липкою, тому антитіла зв'язуються та приймаються ендоцитозом, опосередкованим рецептором.
    3. Він знімає негативні заряди з мембрани, які інакше б відштовхували антитіла.
    4. Він перешкоджає неспецифічному зв'язуванню антитіл з клітинною мембраною.
    Відповідь

    A

    У тесті на вагітність з бічним потоком ви бачите синю смугу на контрольній лінії і відсутність смуги на тестовій лінії. Ймовірно, це ________ тест на вагітність.

    1. позитивний
    2. хибно-позитивний
    3. хибно-негативний
    4. негативний
    Відповідь

    D

    При виконанні FEIA фтор замінює ________, який використовується в ОВД.

    1. антиген
    2. хромогенний субстрат
    3. фермент
    4. вторинні антитіла
    Відповідь

    Б

    Заповніть бланк

    Щоб виявити антитіла проти бактерій у крові за допомогою EIA, ми запустили б a (n) ________, який ми почнемо з приєднання антигену від бактерій до лунок мікротитрової пластини.

    Відповідь

    непряма ІФА

    Коротка відповідь

    Чому в сендвіч-ІФА важливо, щоб антиген мав кілька епітопів? І чому може бути вигідно використовувати поліклональні антисироватки, а не MaB в цьому аналізі?

    Тест-смужка на вагітність виявляє наявність хоріонічного гонадотропіну людини в сечі. Цей гормон спочатку виробляється плодом, а пізніше плацентою. Чому тест-смужка краща для цього тесту, а не використання прямого або непрямого ІФА з їх більш кількісними результатами?

    Критичне мислення

    Позначте первинні та вторинні антитіла та обговоріть, чому вироблення кінцевого продукту буде пропорційно кількості антигену.

    Ys кріпляться до поверхні. Простір між Ys покрито чорним шаром. Коло прикріплено до кожного Y. Інший Y з великим фіолетовим колом прикріплений до кожного з менших кіл, які прикріплені до Ys, прикріплених до поверхні.

    20.5: Флуоресцентні методи авто-антитіл

    Швидка візуалізація бактерій з клінічного зразка, такого як мазок з горла або мокрота, може бути досягнута за допомогою методів флуоресцентних антитіл (ФА), які прикріплюють флуоресцентний маркер (фтороген) до постійної області антитіла, що призводить до репортерної молекули, яка швидко використовується, легко побачити або виміряти, і здатний прив'язуватися до цільових маркерів з високою специфічністю. Ми також можемо позначити клітини, що дозволяє нам точно кількісно визначити певні підмножини клітин або навіть очистити їх для подальших досліджень.

    Множинний вибір

    Припустимо, потрібно кількісно оцінити рівень CD8 Т-клітин в крові пацієнта, що одужує після грипу. Ви лікуєте зразок лейкоцитів пацієнта за допомогою флуоресцентного MaB проти CD8, пропускаєте клітини через проточний цитометр і виробляєте гістограму, показану нижче. Площа під піком зліва (синя) в три рази більше площі піку справа (червоний). Що можна визначити за цими даними?

    Графік з інтенсивністю флуоресценції на осі X і кількість клітин на осі Y. Перший пік досягає 450, а другий досягає 100.

    1. Немає виявлених клітин CD8.
    2. Клітин CD4 в три рази більше, ніж клітин CD8.
    3. Клітин CD8 в три рази більше, ніж клітин CD4.
    4. Клітини CD8 складають приблизно одну четверту від загальної кількості клітин.
    Відповідь

    D

    У даних, описаних в попередньому питанні, середня інтенсивність флуоресценції клітин у другому (червоному) піку становить приблизно ________, що в першому (синьому) піку.

    1. тричі
    2. 100 разів
    3. одна третина
    4. 1000 разів
    Відповідь

    Б

    У прямому тесті на флуоресцентні антитіла, що з наступного ми, швидше за все, шукаємо за допомогою флуоресцентно маркованого MaB?

    1. бактерії в зразку пацієнта
    2. бактерії, виділені від пацієнта і вирощені на агарових пластин
    3. антисироватка від пацієнта, намазаного на скляну гірку
    4. антисироватка від пацієнта, яка зв'язувалася з намистинами, покритими антигеном
    Відповідь

    A

    Заповніть бланк

    У проточній цитометрії клітинні підмножини маркуються за допомогою флуоресцентного антитіла до мембранного білка. Фтор активується a (n) ________, коли клітини проходять повз детекторів.

    Відповідь

    лазер

    Флуоресценція в проточному цитометрі вимірюється детектором, встановленим під кутом до джерела світла. Існує також вбудований детектор, який може виявляти скупчення клітин або ________.

    Відповідь

    фрагменти

    Критичне мислення

    Пацієнт, який підозрюється на сифіліс, тестується як за допомогою тесту VDRL, так і IFA. Тест IFA повертається позитивним, але тест VDRL негативний. Яка найімовірніша причина цих результатів?

    Клініцист підозрює, що хворий на пневмонію може бути заражений Legionella pneumophila. Коротко опишіть дві причини, чому тест DFA може бути кращим для виявлення цього збудника, ніж стандартні методи бактеріології.