14.3: Запуск гелів SDS-СТОРІНКИ
- Page ID
- 4620
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
Налаштовуємо апарат електрофорезу
- Вийміть один з гелів SDS-PAGE з холодильника.
- Акуратно зніміть гребінець з розпірного гелю.
- Зніміть ливарну раму з сендвіча гелевої касети і покладіть сендвіч проти прокладки з одного боку електродного вузла, короткою пластиною зверненою всередину. Помістіть другу гелеву касету або буферну греблю до прокладки з іншого боку електродного вузла.
- Затисніть зелені затискачі з боків електродного вузла (внизу).
- Опустіть камеру в ємність для електрофорезу.
- Заповніть простір між двома гелями трис-гліцин працює буфером. Так утворюється верхня камера для електрофорезу.
- Додайте трис-гліцин працює буфер до зовнішньої (нижньої) камери, поки рівень не буде достатньо високим, щоб покрити платиновий дріт в електродному вузлі.
Завантаження та запуск зразків на гелі SDS-PAGE
- Отримайте витяжки клітин з морозильної камери. Нагадаємо, що зразки вже були змішані з трекуючим барвником і гліцерином. Дайте екстрактам розморозитися і енергійно вихорити протягом ~ 10 секунд, щоб ретельно перемішати вміст.
- Використовуючи гелеві завантажувальні наконечники мікропіпеток (наконечники мають дуже довгі, тонкі точки і підходять P20s або P200s), завантажте до 15 мкл зразка в кожну лунку. Завантажте 5 мкл стандарту молекулярної маси в одну смугу гелю. Завантажуйте зразки повільно і дайте зразкам рівномірно осісти на дні свердловини.
ПРИМІТКА: Обов'язково запишіть порядок зразків, завантажених на гель.
- Підключіть бак до блоку живлення. Встановіть кришку бака на електроди, що виступають вгору з електродного вузла. Вставте електричні висновки в розетки блоку живлення (підключіть чорний до чорного і червоний до червоного).
- Увімкніть блок живлення. Запускайте гель при постійній напрузі 120−150 В. Виконайте гель, поки фронт синього барвника майже не досягне дна гелю. Це може зайняти від 45-60 хв.