8.4: Завантажте та запустіть гель агарози
- Page ID
- 4912
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
- Коли гель застигне, акуратно видаліть гребінець і чорні клини.
- Орієнтуйте гель в ємності для електрофорезу так, щоб лунки (отвори, зроблені гребінкою) були орієнтовані в бік чорного (негативного) електрода. Молекули ДНК будуть рухатися від лунки до червоного (позитивного) електрода. Наповніть резервуар достатньою кількістю буфера TAE, щоб занурити гель (приблизно 275-300 мл).
- Завантажте по одному зразку в кожну свердловину, яка може вмістити ~ 20 мкл. Завантажте 10-12 мкл зразка ПЛР на кожну смугу. Намагайтеся уникати бульбашок повітря під час завантаження зразків.
- Завантажте 5 мкл стандартної молекулярної маси на одну смугу гелю. Переконайтеся, що ви точно зафіксували розташування кожного зразка в гелі.
- Помістіть кришку на бак для електрофорезу і підключіть електроди до джерела живлення (чорно-чорний і червоно-червоний). Переконайтеся, що полярність правильна, перш ніж продовжувати!
- Увімкніть харчування і подайте постійну напругу 125 В.
- Приділіть пильну увагу гелю в міру його запуску. Вимкніть живлення, коли бромфенол синій знаходиться на відстані ~ 2 см від кінця гелю. Не можна допускати стікання барвника з гелю, так як будуть втрачені дрібні молекули ДНК. (Подумайте про розмір ваших продуктів ПЛР.)