8.2: Приготуйте гель агарози

Last updated
Save as PDF

Page ID: 4897

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

У цій лабораторії ви будете використовувати гелі агарози для поділу молекул ДНК, що утворюються в реакціях ПЛР. Ці продукти ПЛР повинні бути добре розчинені на 1,25% агарозних гелів, приготованих в буфері TAE, які забезпечують хороше поділ молекул розміром менше 2 кб. Помістіть ливарний лоток в гелевий апарат. Якщо ви використовуєте апарати BioRad, розташуйте чорні клини на кожному кінці лотка для лиття.

1. Визначте кількість агарози, яка вам знадобиться для 1,25% (1,25 г/100 мл) гелю, який підходить для вашої платформи для лиття. Більшість гелевих апаратів в лабораторії - це системи BioRad Mini-Sub GT з лотком для лиття 7 см х 7 см, який вміщує гель 30 мл. Перевірте свої розрахунки зі своїми товаришами по команді, перш ніж продовжувати. Знімок екрана 2019-01-03 в 11.13.44 PM.png

2. Заповніть градуйований циліндр відповідним об'ємом буфера TAE. Перелийте розчин в невелику колбу.

3. Зважте відповідну кількість агарози. Посипати агарозу на поверхню ТАЕ в колбі. Примітка: агароза не розчиниться, поки не нагріється.

4. Розчиніть агарозу, нагріваючи розчин з інтервалом 15-20 секунд в мікрохвильовій печі. Після кожного інтервалу знімайте колбу і акуратно крутіть її навколо, щоб розігнати вміст. Зверніть увагу, якщо частинки агарози все ще очевидні або якщо агароза розчинилася. Кращі гелі виготовляються з агарози, яка НЕ була пересмажена.

ПРИМІТКА З БЕЗПЕКИ: Розчин агарози буде дуже ГАРЯЧИМ, коли ви видалите його з мікрохвилі! Будьте обережні при поводженні з колбою. Будьте особливо обережні, щоб не контактувати з паром, який буде надходити через отвір колби. Складіть кілька паперових рушників і оберніть їх навколо шийки колби, коли будете з нею обробляти. Якщо вам трапиться пролити гарячу агарозу на шкіру, негайно вимийте її холодною водою і попередьте TA.

5. Дайте розчину агарози охолонути, поки не зможете комфортно доторкнутися до колби руками. Розчини агарози понад 60 °С викривлять лоток для лиття! Налийте гель. Помістіть гребінець зразка на місце. Не рухайте ливарну платформу, поки гель не схопиться. Ви будете знати, що гель встановлюється, коли він стає непрозорим. Дайте гелю затвердіти близько 20 хвилин після того, як він схопиться.