Skip to main content
LibreTexts - Ukrayinska

3.5: Вправа 2 - спостереження за культурами дріжджів і бактерій

  1. Last updated
  2. Save as PDF
  • Page ID
    4684

    • \( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

    Студенти повинні працювати в групах по три людини. Кожен студент повинен підготувати один з трьох слайдів, перерахованих нижче. Студенти в групі повинні поділитися своїми слайдами. Кожна група отримає три культури S. cerevisiae (SC), S. pombe (SP) та кишкової палички (EC).

    1. Позначте три слайди. Кожен слайд буде містити два зразки для порівняння. Слайди досить великі, щоб вмістити два зразки - і два кришки. Пронумеруйте слайди за допомогою Sharpie (Використовуйте матову область, якщо слайд має такий.) Під час роботи обов'язково записуйте, який із двох зразків знаходиться ближче до маркованого кінця слайда. Запишіть свої дані в місцях, наведених нижче, або в блокноті.

    Слайд 1: порівняйте культури S. pombe та S. cerevisiae.
    Слайд 2: порівняйте культури S. cerevisiae та кишкової палички.
    Слайд 3: культури S. pombe та E. coli з метою 100X (1000X).

    2. Готують концентровані суспензії з культивованих клітин. Всі культури клітин здаються каламутними, тому що щільність клітин висока. Незважаючи на це, ви будете спостерігати кілька мікролітрів клітинної суспензії під мікроскопом, і клітин може бути мало і далеко між ними.
    Концентруйте культури, щоб переконатися, що в полі зору мікроскопа буде достатньо клітин для значущих спостережень.

    • Концентруйте клітини, центрифугуючи пробірки, що містять культури, на підрахунок
      10 в мікроцентрифузі, встановленої на максимальній швидкості. Утримуйте кнопку Quick на мікроцентрифугах Labnet або кнопку між двома циферблатами на мікроцентрифугах Eppendorf.
    • Видаліть більшу частину культурального середовища мікропіпеткою Р1000, поки середовище просто не покриє клітинну гранулу.
    • Пересушити клітини за допомогою вихрового змішувача.

    3. Перенесіть і фарбуйте зразки клітин.

    • Перенесіть 2 мкл кожної клітинної суспензії на слайд, використовуючи мікропіпетку Р20.
    • Фарбуйте клітини, додаючи 6 мкл йоду Грама в кожну клітинну суспензію мікропіпеткою Р20. Покрийте кожен зразок кришкоюковскою.

    4. Спостерігайте за зразками трьох видів, використовуючи цілі 40X та 100X. Кожен член вашої групи повинен спостерігати за двома видами на слайді, які він підготував. Працюйте з іншим членом групи, щоб зробити спостереження за третім видом. Запишіть свої спостереження і відповідайте на питання в місцях нижче.

    Примітка

    Об'єктив для занурення масла необхідний для об'єктиву 100X, і це масло може пошкодити об'єктиву 40X. Будьте обережні, точно дотримуйтесь наведених нижче інструкцій.

    Етапи повинні виконуватися в правильному порядку, щоб захистити лінзи!

    1. Зосередьтеся мікроскоп на будь-якому і s. cerevisiae або s. pombe культури. Спочатку сфокусуйтеся за допомогою 10-кратної мети, потім перейдіть до 40X об'єкту та переорієнтуйтеся за допомогою точного управління фокусом. Запишіть свої спостереження.
    2. Тепер ви готові перейти до мети занурення масла 100X! Поверніть носову частину на півдорозі між 40X і 100X цілями. НЕ рухаючи сцену, нанесіть краплю масла для занурення на верхній частині вашого ковзання, де світло світить через слайд. ПОВІЛЬНО обертайте об'єкт 100X на місце, занурюючи його в краплю масла. Використовуйте регулятор фокусування FINE, щоб привести дріжджі у фокус. Запишіть свої спостереження.
    3. Поверніть носову частину на півдорозі між 40X і 100X цілями знову. Не намагайтеся перемістити сцену з метою 100X на місці.
    4. Використовуйте елементи керування XY, щоб перемістити сцену до другого зразка на слайді БЕЗ зміни фокусу.
    5. Поверніть об'єктив 40X в потрібне положення. Налаштуйте фокус і запишіть свої спостереження.
    6. Повторіть крок 2 вище і запишіть свої спостереження в 100X.
    7. Поверніть об'єкт 100X з положення. Зніміть гірку і викиньте його в скляні відходи. Очистіть об'єктив 100X за допомогою паперу для лінз. Перевірте, чи немає масла ні на одній з інших лінз.

    Спостереження S. cerevisiae
    Намалюйте клітини, які ви бачите за допомогою двох різних лінз у коробках нижче.

    На якій фракції клітин виявляються бутони?
    Чи можете ви виявити будь-які субклітинні структури при 1000X збільшенні?

    S.
    pombe     спостереження Намалюйте клітини, які ви бачите з двома різними лінзами в коробках нижче.

    На якій фракції клітин виявляються перегородки?
    Чи можете ви виявити будь-які субклітинні структури при 1000X збільшенні?

    Спостереження E. coli
    Намалюйте клітини, які ви бачите з двома різними лінзами в коробках нижче.

    Яка фракція клітин рухлива?
    Як би ви описали структуру кишкової палички?