10.2: Тестування на мутагенні хімічні речовини у бактерій та мишей
- Page ID
- 5845
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
Тест Еймса
Миші Big Blue трансгенні для сегмента ДНК, який містить ДНК бактеріофага лямбда, вірусу, який заражає кишкову паличку, і який служить тут вектором для 3 генетичних елементів з лак-оперону кишкової палички:
- ген LaCi
- оператор оперона
- ген бета-галактозидази (LaCZ)
Аналіз
Трансгенним мишам дають повторні дози підозрюваного канцерогену протягом тижня або двох. Якщо хімічна речовина є мутагенною, це спричинить випадкові мутації по всьому геному кожної клітини миші. Якщо мутація виникає або в гені LaCi (який кодує лак-репресор) або в операторі,
ген (LaCZ) для бета-галактозидази більше не буде пригнічуватися. Щоб виявити це,
- ДНК витягується з тканин обробленої миші.
- Вектор виділяють і використовують для виготовлення функціональних бактеріофагів.
- Клітини кишкової палички змішуються з бактеріофагом і поширюються на твердому культуральному середовищі.
- Бактеріофаги заражають і знищують («лизують») клітини кишкової палички.
- Це призводить до появи чітких кругових зон, званих бляшками, на «газоні» бактерій.
- Перш ніж вони помруть, клітини, які були заражені бактеріофагами, що несуть мутований LaCI або оператор, вироблять бета-галактозидазу.
- Це реагує з субстратом в культурному середовищі, перетворюючи його в синій колір.
- Бактеріофаги з немутованими генами виробляють безбарвні бляшки, оскільки бета-галактозидаза не синтезується.
- Підрахуйте як безбарвні, так і блакитні бляшки.
- Число синіх бляшок, поділене на загальну кількість бляшок, дає частоту мутації.
На цій фотографії зображений один мутантний (синій) наліт на галявині кишкової палички, що містить багато немутантних (прозорих) бляшок.