9.9: Виділення факторів транскрипції
- Page ID
- 5693
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
Фактори транскрипції надзвичайно різноманітні, і будь-який один фактор являє собою лише крихітну частку білкових молекул, присутніх в клітині. На цій сторінці описано, як можна ізолювати і очищати такі рідкісні молекули.
Приклад: Ізоляція лакового репресора
Клітина кишкової палички містить всього 10-20 копій лакового репресора. Це являє собою співвідношення всього 1 молекули в 50 000 білкових молекул в клітині. Однак специфіка лакового репресора для послідовності ДНК оператора забезпечує механізм вилову його з суміші.
Аффінна хроматографія
Для афінного хроматографа проводиться наступна процедура:
- Вивчіть послідовність, до якої прив'язується репресор (за допомогою слідів).
- Синтезують сегмент ДНК, що містить послідовність.
- Прикріпіть цю штучну молекулу до кульок інертного, твердого середовища (матриці).
- Налийте екстракт клітин кишкової палички поверх кульок.
- Тільки молекули, специфічні для послідовності ДНК - в цьому випадку молекули лакового репресора - зв'язуватимуться з намистинами.
- Після того, як невідповідні молекули білка пройшли через колону, промийте кульки буфером, який вивільнить молекули лак-репресора, щоб їх можна було вивчити.