8.9: ЛАД

Last updated
Save as PDF

Page ID: 2636

\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)

Іншим методом виявлення молекулярних взаємодій є флуоресцентна резонансна передача енергії (FRET) - також називається резонансною передачею енергії Фьорстера, резонансною передачею енергії (RET) або електронною передачею енергії (EET). Методика заснована на спостереженні, що молекула, збуджена поглинанням світла, може передавати енергію сусідній молекулі, якщо спектр випромінювання першої молекули перекривається зі спектром збудження другої (рис.\(\PageIndex{1}\)) Ця передача енергії може відбуватися тільки в тому випадку, якщо два молекули досить близько один до одного (не більше декількох нанометрів один від одного).

Малюнок\(\PageIndex{1}\): Спектри збудження та випромінювання для донорських та акцепторних флюорофорів у FRET. Вікіпедія

У методиці донорський флюорофор або акцепторний флюорофор ковалентно прикріплений до двох цікавлять молекул. Акцептор флюорофор призначений для прийому енергії від молекули донора (помаранчева пунктирна лінія на малюнку\(\PageIndex{2}\)) і флуоресценції на унікальній довжині хвилі (червона стрілка), коли він отримує цю енергію від донора.

Малюнок\(\PageIndex{2}\): Флуоресцентний резонансний перенесення енергії між донорським і акцепторним хромофорами. Зображення Пера Якобсона

Крім того, довжина хвилі світла, яку поглинає донор, унікально пристосована для донорського флюорофора і не впливає на акцепторний флуорофор. Єдиний спосіб, яким акцептор може флуоресціровать, - це якщо він знаходиться досить близько, щоб отримувати енергію, передану від донора (червона стрілка). Ця флуоресценція матиме унікальну довжину хвилі, а також. Якщо донор і акцептор недостатньо близькі один до одного, донор флуоресцентує і випромінює світло, відповідне зеленій або чорній стрілці. Це різні довжини хвиль, ніж у червоної стрілки.

Експеримент починається в клітині з одним білком з донорським флюорофором, а іншим білком з акцептором флюорофора. Світло довжини хвилі, що збуджує донорський флюорофор, світиться на клітину. Якщо білок з донором взаємодіє з білком, що несе акцептор, то відбувається передача енергії від донорського флуорофора до акцептора і виявляється унікальна флуоресценція (червона лінія) акцептора. Якщо два білки не взаємодіють, то флуоресценція від акцептора мало або зовсім не виявляється.