8.1: Лізис клітин
- Page ID
- 2650
\( \newcommand{\vecs}[1]{\overset { \scriptstyle \rightharpoonup} {\mathbf{#1}} } \) \( \newcommand{\vecd}[1]{\overset{-\!-\!\rightharpoonup}{\vphantom{a}\smash {#1}}} \)\(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \(\newcommand{\id}{\mathrm{id}}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\) \( \newcommand{\kernel}{\mathrm{null}\,}\) \( \newcommand{\range}{\mathrm{range}\,}\) \( \newcommand{\RealPart}{\mathrm{Re}}\) \( \newcommand{\ImaginaryPart}{\mathrm{Im}}\) \( \newcommand{\Argument}{\mathrm{Arg}}\) \( \newcommand{\norm}[1]{\| #1 \|}\) \( \newcommand{\inner}[2]{\langle #1, #2 \rangle}\) \( \newcommand{\Span}{\mathrm{span}}\)
Джерело: BiochemFFA_8_1.pdf. Весь підручник доступний безкоштовно від авторів за адресою http://biochem.science.oregonstate.edu/content/biochemistry-free-and-easy
Щоб відокремити сполуки від клітинних середовищ, потрібно спочатку розбити (лізувати) клітини. Клітини розбиваються відкритими, в буферизованих розчинами, для отримання лізату. Існує кілька способів досягнення цього.
- Осмотичний шок та ферменти: Одним із способів лізувати клітини є зниження іонної сили середовища, в якому знаходяться клітини. Це може призвести до того, що клітини набрякають і лопаються. М'які поверхнево-активні речовини можуть бути використані для руйнування мембран. Більшість бактерій, дріжджів і рослинних тканин стійкі до осмотичних ударів, через наявність клітинних стінок, і зазвичай потрібні більш сильні методи руйнування. Ферменти можуть бути корисними, допомагаючи деградувати клітинні стінки. Лізоцим, наприклад, дуже корисний для руйнування стінок бактерій. Інші ферменти, які зазвичай використовуються, включають целюлазу (рослини), протеази, манни та інші.
- Механічне порушення: Механічне перемішування може застосовуватися у вигляді кульок, які струшуються сумішшю клітин. При цьому методі клітини бомбардують крихітними скляними намистинами, які розбивають осередки. Sonication (звукові хвилі 20-50 кГц) забезпечує альтернативний тип збудження, який може бути ефективним. Метод шумний, однак, і генерує тепло, яке може бути проблематичним для термочутливих з'єднань.
- Порушення тиску: Ще один засіб порушення клітин передбачає використання «клітинної бомби». При цьому методі клітини поміщаються під дуже високим тиском (до 25 000 фунтів на квадратний дюйм), а потім тиск швидко звільняється. Швидка зміна тиску призводить до виділення розчинених газів у клітині у вигляді бульбашок, які, в свою чергу, розбивають відкриті клітини.
- Кріопульверизація: Кріопропульверизація часто застосовується для зразків, що мають жорсткий позаклітинний матрикс, такий як сполучна тканина, насіння та хрящ. У цій техніці тканини заморожуються за допомогою рідкого азоту, а потім виконується ударна пульверизація (як правило, шліфування, за допомогою ступки і товкача або потужної електричної шліфувальної машини). Отриманий таким чином порошок потім підвішують у відповідному буфері.
Який би метод не застосовувався для створення лізату, сирі фракції, отримані з нього, повинні бути додатково оброблені шляхом фракціонування.